Sıçan Beyninde Elektrofizyolojik Kayıt ile İlaç Mikroenjeksiyonu

Elektrot içeren bir enjeksiyon sistemi olan bir enjektrode ile başlayın. Bu, bir cam mikropipet içine yerleştirilmiş bir mikro iğne ve bir gümüş tel elektrot içerir.

Enjekte edileni, ilacın beyin içindeki yayılımının izlenmesini kolaylaştırmak için bir boya içeren bir test ilacı çözeltisi ile doldurun.

Enjeksiyona mineral yağ ile doldurulmuş bir şırınga takın. Fazla sıvıyı silin.

Bu enjeksiyonu stereotaksik bir üniteye sabitleyin ve bir mikro pompa sistemine bağlayın.

Enjeksiyonu, kafatasında cerrahi bir delik bulunan anestezi uygulanmış bir sıçanın hedef beyin bölgesine yerleştirin.

Hedef bölgeye nüfuz etmek için enjeksiyonu kademeli olarak indirin.

Optimum enjeksiyon yerleşimini onaylayan belirli elektrik sinyallerini aldıktan sonra yerleştirmeyi durdurun.

Doku kurumasını önlemek için açıkta kalan kafatasını ılık agar ile örtün.

Beyin dokusunun stabilize olmasına izin verin.

İlacın istenen dozunu enjekte edin.

Uygulanan ilaca yanıt olarak nöronal aktiviteyi izlemek için elektrik sinyallerini kaydedin.

Önce 5 ila 10 mikrolitrelik bir şırıngayı mineral yağ ile doldurarak enjeksiyonu hazırlayın. Daha sonra, ilgilenilen ilacı fizyolojik tuzlu su içinde bir boya ile hazırlayın. Burada, %0.5 Chicago Sky blue, 300 mikromolar GABA ile karıştırılır. Şimdi, önce hazırlanan çözelti ile 1 mililitrelik bir şırınga yükleyerek ve ardından pipeti yüklemek için şırıngayı kullanarak enjeksiyon pipetini doldurun.

Şırıngayı çıkarırken, piston üzerinde hafif bir basınç uygulayın, böylece bir vakum enjeksiyondan çözeltiyi çıkarmaz. Olası sızıntı noktalarında sızan sıvıyı kontrol edin. Fazla sıvıyı temizleyin ve sızıntı olup olmadığını tekrar kontrol edin. Şimdi mikro şırıngayı mineral yağ ile enjeksiyona takın. Ardından, fazla solüsyonu gazlı bezle silin.

Enjeksiyon ucunu kontrol edin. İçinden küçük damla çözelti akıtmak mümkün olmalıdır. Aksi takdirde tıkanır veya sızar. Şimdi, enjeksiyonu bir mikro pompa sistemine güvenli bir şekilde monte edin. Ardından, enjektrobun konumunu hedef koordinatlara getirin ve elektrodu, görsel uyarılmış potansiyellerin kaydedilmesiyle tanımlanabilen üst kollikulusa indirin.

Elektrot indirilirken, tıkanmayı önlemek için düşük bir enjeksiyon hızı uygulayarak küçük bir pozitif basınç uygulayın. Yapıya ulaşıldığında enjeksiyonu durdurun. Enjeksiyonu yerleştirdikten sonra, kurumasını önlemek için açıkta kalan korteksi ılık agar ile örtün. Elektrotun son yerleştirilmesinden sonra, elektrodu çevreleyen dokunun stabilizasyonuna izin vermek için 30 dakika bekleyin. Daha sonra, superior colliculus'taki nöronal aktivitenin inaktivasyonunu kontrol edene kadar dakikada 40 nanolitre oranında 400 ila 800 nanolitre çözelti enjekte edin.

Elektrot, inhibitör çözeltinin enjeksiyonu sırasında sivri uçlarda bir azalma göstermelidir.