Düz Montajlı Bir Fare Retinasından Elektrofizyolojik Kayıt için Tam Hücre Yama Kelepçesi Oluşturma

Düz montajlı bir fare retinasını bir kayıt odası içindeki fizyolojik bir çözeltiye yerleştirin.

Mikroskop kullanarak retinanın üzerine bir kayıt pipeti yerleştirin. Pipet bir elektrot içerir ve dahili bir çözelti ile doldurulur.

Pipetin tıkanmasını önlemek için pozitif basınç uygulayın, retinaya yerleştirin ve ardından doku hasarını önlemek için basıncı azaltın.

Pipeti, diğer nöronlara sinaptik olarak bağlı olan yıldız patlaması amakrin hücrelerine veya SAC'lere doğru ilerletin.

Zarında bir çukur oluşana kadar bir hücreye yaklaşın. Zarın uca yapışmasına izin vererek basıncı serbest bırakın.

Pipete bir membran yaması çekmek için negatif bir akım kullanın.

Zarı yırtmak için emme uygulayın, elektrot ile hücre sitoplazması arasında süreklilik sağlayın, tam hücre yama kelepçesi adı verilen bir teknik.

Sinaptik akımları kaydetmek için, SAC'nin membran potansiyelini sabit tutmak için bir voltaj uygulayın.

Sinaptik olarak bağlı nöronlar tarafından salınan nörotransmiterler, elektrot tarafından ölçülen SAC sinaptik reseptörleri boyunca iyon akışını tetikler.

Bu prosedürde, dahili çözeltiyi bir şırınga filtresinden özel dolgu filamentine süzün. Ardından, filamenti yeni çekilmiş bir mikropipe