JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:29 dk. • July 8th, 2025
1D desenli nöronal kültür içeren bir lamel alın.
Nöronlar, kalsiyum bağlanması üzerine floresan veren bir kalsiyum indikatör boyası ile yüklenir.
Lameli hücre dışı bir kayıt çözeltisi içeren bir floresan mikroskobu görüntüleme odasına aktarın.
Bir mesafe ile ayrılmış iki paralel tel elektrotlu bir tutucu monte edin.
Tutucuyu ters çevirin ve elektrotlar kayıt çözeltisine daldırılmış halde nöronal kültürün üzerine yerleştirin.
Elektrotları bir amplifikatöre bağlayın. Yaralanmaya neden olmadan nöronlar boyunca düzgün bir tek yönlü elektrik alanı oluşturmak için DC olmayan darbeli bir bipolar kare dalga uygulayın.
Üretilen elektrik alanı nöronları uyararak bir aksiyon potansiyelini tetikler.
Aksiyon potansiyeli akson boyunca hareket eder, voltaj kapılı kalsiyum kanallarını aktive eder ve nöron terminaline kalsiyum akışına neden olur. Ayrıca, nörotransmiterler sinaps içine salınır ve sinaptik iletimi kolaylaştırır.
Kalsiyum iyonu akışını takiben, bu iyonlar hücre içi boyaya ve floresana bağlanır, bu da elektriksel stimülasyona yanıt olarak nöronal aktiviteyi gösterir.
Elektrik stimülasyonundan önce, oturmuş lamel bir görüntüleme odasına yerleştirin. Hücreleri sabit yönde bir elektrik alanı ile uyarmak için, 11 milimetre ile ayrılmış ve 13 milimetrelik lameller üzerine kaplanmış kültürün zıt taraflarında bulunan iki paralel elektrot kullanın. Ardından, kültür görüntüleme odasını ve eşleşen elektrot tutucusunu, tel elektrotlar hücre dışı ortama daldırılacak ve kültürün bir milimetre üzerine yerleştirilecek şekilde monte edin.
Ardından, tek elektrot çiftini, jeneratörden gelen sinyali yükselten işlemsel amplifikatöre takın. % 50 görev döngüsü ve 22 volt genlik ile tek bir bipolar kare dalga darbesi uygulayın. Elektrotlarda meydana gelebilecek elektrolizi önlemek için DC bileşeni olmayan bir bipolar dalga kullanın. Etkili stimülasyonu sağlamak için 10 mikrosaniyeden dört milisaniyeye kadar süren nabzı uygulayın, ancak hücre hasarını önleyin.