JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:26 dk. • July 8th, 2025
Hücre dışı bir kayıt çözeltisi içeren bir kültür plakası içinde nöronal halka kültürü olan desenli bir lamel alın.
Bu hücreler, hücre içi kalsiyum seviyelerini ölçmek için kalsiyuma duyarlı bir floresan boya ile önceden inkübe edilir.
Plakayı bir floresan mikroskobu aşamasına yerleştirin.
Optimum stimülasyonu sağlamak için bir manyetik stimülatörün bağlı dairesel manyetik bobinini eşmerkezli olarak kültürün üzerinde uygun bir mesafede konumlandırın.
Manyetik stimülatörü kullanarak, zamanla değişen bir manyetik alan oluşturmak için bobin boyunca yüksek voltaj ve akım uygulayın.
Bu manyetik alan, nöronlarda bir elektrik alanı indükleyerek bir aksiyon potansiyeli oluşturur.
Sinir terminaline ulaştıktan sonra, aksiyon potansiyeli, voltaj kapılı kalsiyum kanallarını aktive ederek hücreye kalsiyum akışına ve sinapsta nörotransmitter salınımına izin verir.
Bu salınım, sinaptik bağlantılar yoluyla komşu nöronlara sinyal iletimini kolaylaştırır.
Kalsiyum iyonu akışı nedeniyle, bu iyonlar hücre içi kalsiyuma duyarlı boyaya bağlanır ve nöronal aktivitenin göstergesi olan floresansı arttırır.
Manyetik stimülasyona başlamak için, mikroskop altında dairesel bir şekil şeklinde büyütülmüş bir nöronal kültür yerleştirin. Ticari olarak temin edilebilen standart bir dairesel manyetik stimülasyon bobini ve destekleyici bir stimülatör kullanarak kültürü uyarın.
Standart olmayan manyetik alan yoğunluklarına sahip kültürleri uyarmak için, özel yapım bir manyetik stimülasyon bobinini özel yapım stimülatörüne bağlayın. Ardından, bir lazer işaretçi yardımıyla, başarılı bir stimülasyonu sağlamak için kültürün merkezini bobinin merkezine hizalayın.
Bobin konumunu, kültür merkezinin yaklaşık beş milimetre üzerinde kalacak şekilde ayarlayın. Stimülasyon bobini uygun şekilde yerleştirildikten sonra, stimülatörü beş kilovolta kadar bir potansiyele yükleyin. Daha sonra, yüksek akımlı, yüksek voltajlı bir anahtar kullanarak, kültürlenmiş nöronların aktivitesini uyaran manyetik bir darbe oluşturmak için yüksek voltajı ve akımı stimülasyon bobininden boşaltın.