Tüm Hücre Yama Kelepçesi Kullanarak Floresan Nöronların Uyarılabilirliğinin İncelenmesi

aCSF ile perfüze edilmiş bir kayıt odasında hareketsiz hale getirilmiş transfekte edilmiş bir fare koronal dilimi alın.

Dilim, bir hedef enzim ve bir floresan proteini eksprese eden seyrek bir piramidal nöron popülasyonu içerir.

Nöronal sinyalleri ölçmek için hücre içi bir çözelti ve bir amplifikatöre bağlı bir elektrot içeren bir kayıt pipeti oluşturun.

Mikroskobik olarak hedef doku alanını tanımlayın ve bir floresan nöronu bulun.

Tıkanmayı önlemek ve hedef nörona ilerletmek için pipete pozitif basınç uygulayın.

Pozitif basınç, temas halinde nöronal membran üzerinde hafif bir girintiye neden olur.

Membran ile uç arasında sıkı bir sızdırmazlık oluşturarak basıncı serbest bırakın.

Nöronu stabilize etmek için tutma potansiyelini sabit bir negatif değere ayarlayın.

Zarı yırtmak, sitoplazmayı pipetin iç kısmına bağlamak ve tam hücre konfigürasyonu oluşturmak için kısa bir negatif basınç uygulayın.

Akım kelepçesi moduna geçin ve nöronal uyarılabilirliği gösteren aksiyon potansiyelleri üreten pozitif akım darbeleri uygulayın.

Bir Pasteur pipeti veya küçük bir fırça kullanarak bir dilimi kayıt odasına aktarın. Dilimi bir arp ile basılı tutun ve dakikada 2 mililitre hızında ACSF ile perfüz