Tüm Hücre Yama Kelepçesi Kullanarak Floresan Nöronların Uyarılabilirliğinin İncelenmesi

0 views • 3:06 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

aCSF ile perfüze edilmiş bir kayıt odasında hareketsiz hale getirilmiş transfekte edilmiş bir fare koronal dilimi alın.

Dilim, bir hedef enzim ve bir floresan proteini eksprese eden seyrek bir piramidal nöron popülasyonu içerir.

Nöronal sinyalleri ölçmek için hücre içi bir çözelti ve bir amplifikatöre bağlı bir elektrot içeren bir kayıt pipeti oluşturun.

Mikroskobik olarak hedef doku alanını tanımlayın ve bir floresan nöronu bulun.

Tıkanmayı önlemek ve hedef nörona ilerletmek için pipete pozitif basınç uygulayın.

Pozitif basınç, temas halinde nöronal membran üzerinde hafif bir girintiye neden olur.

Membran ile uç arasında sıkı bir sızdırmazlık oluşturarak basıncı serbest bırakın.

Nöronu stabilize etmek için tutma potansiyelini sabit bir negatif değere ayarlayın.

Zarı yırtmak, sitoplazmayı pipetin iç kısmına bağlamak ve tam hücre konfigürasyonu oluşturmak için kısa bir negatif basınç uygulayın.

Akım kelepçesi moduna geçin ve nöronal uyarılabilirliği gösteren aksiyon potansiyelleri üreten pozitif akım darbeleri uygulayın.

Bir Pasteur pipeti veya küçük bir fırça kullanarak bir dilimi kayıt odasına aktarın. Dilimi bir arp ile basılı tutun ve dakikada 2 mililitre hızında ACSF ile perfüze edin. GFP pozitif bir nöronu yamalamak için, ilgilenilen alanı mikroskop aracılığıyla 10x'te bulun. Ardından, 60x hedefini kullanarak GFP pozitif bir hücre bulun.

Ardından, kayıt elektrodunu hücre içi çözelti ile doldurun. Ardından, pipet tutucusuna bir cam pipet yerleştirin. Daha sonra pipet ucunu banyoya yerleştirin ve uca odaklanın. Pipet banyoya girdikten sonra, geri basınç kontrol sisteminden pozitif basınç uygulayın.

Pipetteki geri basıncı korurken görsel rehberlik altında ilgilendiğiniz hücreye yaklaşın. Hücre yüzeyinde küçük bir çukur ortaya çıktığında, basıncı serbest bırakın. Bu noktada, 1 gigaohm'dan daha büyük bir dirence sahip sıkı bir sızdırmazlık oluşturulabilir. Aksi takdirde, kolaylaştırmak için hafif bir negatif basınç uygulayın.

Conta oluşturulurken, tutma voltajı kelepçesini eksi 60 milivolta getirin. Gigaohm contası oluşturulduktan sonra, hücre zarını yırtmak ve tüm hücre moduna geçmek için bir emme darbesi uygulayın. Tam hücre moduna geçtikten sonra, voltaj-kelepçeden akım-kelepçe moduna geçin ve kayda başlayın.

07:23

Beyin Dilimleri tüm hücre Patch-kelepçe Kayıtlar

Related Videos

0 Views

08:39

Channelrhodopsins'teki İyon Seçiciliğinin Elektrofizyolojik Olarak Belirlenmesi için Tam Hücreli Yama Kelepçesi Kayıtları

Related Videos

0 Views

10:52

Sinaptik çeşitlilik bütün hücreli yama-kelepçe Elektrofizyoloji kullanarak değerlendirilmesi

Related Videos

0 Views

03:42

Tüm Hücre Yama Kelepçesi Elektrofizyolojisi: Nöronların Elektriksel Özelliklerini İncelemek İçin Bir Yöntem

Related Videos

0 Views

03:12

Yama Kelepçesi Yöntemi ile Tüm Hücre Konfigürasyonunun Oluşturulması

Related Videos

0 Views

03:05

Fare hipokampal dilimlerindeki nöronların fotostimülasyon ve tam hücre yama kelepçesi kayıtları

Related Videos

0 Views

03:45

Bir omurilik diliminin substantia jelatinosa nöronunda tam hücre yama kelepçesi kaydı

Related Videos

0 Views

08:58

Kızılötesi Sinir Stimülasyon en mekanizmaları incelenmesi için tüm Hücre Patch Kelepçe

Related Videos

0 Views

11:34

Ifade İyon Kanallarının Çalışması için özel Duyusal Nöron Populasyonlarının Belirlenmesi

Related Videos

0 Views

08:44

Deafferentated Fare Retina bir düz montaj Hazırlık patlaması amacrine hücreleri Yama Kelepçe Kaydı

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026