JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 4:01 dk • July 8th, 2025
Anestezi uygulanmış bir yenidoğan domuz yavrusunu stereotaksik bir çerçeveye sabitleyin.
Kafatasını ortaya çıkarmak için orta hat kesisi yapın.
Kafatasının bir kısmını çıkarın, ardından beyne erişmek için durayı çıkarın.
Bir mikroelektrot dizisini veya MEA'yı stereotaksik çerçeveye sabitleyin.
MEA, glutamat oksidaz ile kaplanmış glutamata duyarlı bölgeler ve inaktif bir protein matrisi ile kaplanmış sentinel bölgeler dahil olmak üzere rijit bir şaft ve kayıt bölgelerinden oluşur.
MEA'yı cerrahi bölge üzerine dikey olarak yerleştirin ve stabil bir temel voltaj referansı için kafa derisinin altına bir sahte referans elektrodu yerleştirin.
MEA'yı ilgilenilen beyin bölgesine yerleştirin ve ölçümü başlatın.
Kayıt bölgelerindeki glutamat oksidaz, hücre dışı beyin glutamatını elektrot yüzeyinde elektrokimyasal oksidasyona uğrayan ve akım üreten hidrojen peroksite dönüştürür.
Sentinel siteleri arka plan gürültüsünü ölçer.
Anestezi altında beyin glutamat seviyelerini ölçmek için glutamata duyarlı bölge sinyallerini sentinel bölge sinyallerine normalleştirin.
Başlamak için, kafatasını neşterle çizmekten kaçınmak için dikkatli kullanarak kafatası boyunca 4 ila 6 santimetrelik bir orta hat kesisi oluşturun. Kesi yapıldıktan sonra, kafa derisini kafatasından kaldırmak için hafif retraksiyon ve künt diseksiyon kullanın.
Ardından, herhangi bir bağ dokusunu çıkarmak ve dikiş çizgilerini ortaya çıkarmak için kafatasını bir gazlı bezle nazikçe ovalayın. Ardından, kraniyotomi için amaçlanan yeri belirleyin. İlgilenilen alan belirsiz kalırsa, kafa derisini daha fazla yansıtın.
Şimdi, ilgilenilen yapının üzerinde yaklaşık 0,25 santimetre kare olan bir kraniyotomi penceresi oluşturmak için bir cerrahi matkap kullanın. Duraya veya altta yatan beyne zarar vermemeye dikkat edin. Gerektiğinde, beyin dokusunun üzerindeki durayı çıkarmak için ince cerrahi aletler kullanın. Beyne zarar vermemek için çok dikkatli olun.
Bu deney, daha önce tarif edilmiş, glutamat oksidaz ile önceden kaplanmış ve MPD ile elektrolizle kaplanmış bir enzim bazlı mikroelektrot dizisi kullanır. Mikroelektrot dizileri, domuz yavrularıyla kullanım için özelleştirilmiş 40 milimetrelik sert bir şafta sahiptir. Metal kolu mikromanipülatöre sabitleyin ve ardından mikroelektrot dizisini bregma üzerine mümkün olduğunca dikey olarak konumlandırın.
Ardından, bregma koordinatlarına dikkat ederek kafatasının yüzeyine dokunmadan diziyi mümkün olduğunca alçaltın. Şimdi, ilgilenilen yapının tam stereotaksik koordinatlarını belirlemek için bir domuz yavrusu beyin atlası kullanın. Ardından, mikroelektrodu uygun şekilde yeniden konumlandırın.
Ardından, yalancı referans elektrodunu kafa derisinin altına yerleştirin ve hayvanla teması sağlayın. Şimdi, mikroelektrot dizisini yavaşça beyne neredeyse uygun derinliğe indirin. Son 2 milimetrelik hareket için, diziyi minimum doku travması ile ilgilenilen yapıya nazikçe indirmek için bir hidrolik mikro sürücü kullanın.
Mikroelektrot dizisi yerleştirildikten sonra, elektrotların taban çizgisine ulaşmasını sağlamak için 30 dakika bekleyin. Ardından, yaklaşık üç saat boyunca ölçüm yapın. Domuz yavrusu deneyden sağ çıkacaksa, veri topladıktan sonra kesiği kapatın.