Penetran Mikroelektrot Dizisi Kullanılarak Katlanmamış Hipokampal Dokunun Nöral Aktivitesinin Kaydedilmesi

Nöral dokudan gelen elektrik sinyallerini kaydeden penetran mikroelektrot dizisini veya PMEA'yı içeren bir kayıt odası alın.

Girişi, bir trivalf konektörü kullanarak 4-aminopiridin veya 4-AP ile oksijenli aCSF ve oksijenli aCSF içeren şişelere bağlayın.

Çıkışı bir vakum tüpüne takın.

Giriş ve trivalf arasındaki boru hattını fizyolojik sıcaklığa ısıtın.

Giriş ve çıkış kapalıyken, katlanmamış hipokampusu odaya aktarın.

Mikroskop altında, hipokampusu PMEA'ya yerleştirin.

Çözeltiyi hazneden çıkarın.

Dokuyu PMEA elektrotlarına tutmak için bir doku ankrajı yerleştirin.

aCSF akışını başlatmak için girişi ve çıkışı açın.

Nöronal iklimlendirmeye izin vermek için dokuyu aCSF ile inkübe edin.

Ardından, 4-AP ile aCSF'de akış. 4-AP, nöronal potasyum kanallarını bloke ederek aksiyon potansiyeli süresini uzatır.

PMEA, hipokampal nöronlardan gelen gelişmiş nöral ateşlemeyle orantılı elektrik sinyallerini yakalar.

Bu prosedürde, bir şişeyi normal aCSF ile ve başka bir şişeyi 4-AP aCSF ile doldurun. Deneylerin başından itibaren çözeltileri %95 oksijen, %5 karbondioksit ile köpürtün. Bir deney sırasında hangi çözeltinin seçileceğini kontrol etmek için bir trivalf konektörü kullanın.

Ardından, çözeltiyi bir toz haznesine çıkarmak için haznenin çıkışına bir vakum tüpü bağlayın. Çözeltiyi kayıt odasına vermeden önce boru hattını ısıtın ve 35 santigrat derece kontrollü sıcaklıkta tutun. Kayıt odasının giriş ve çıkışını kapattıktan sonra, katlanmamış hipokampusu kayıt odasına aktarmak için özel yapım bir cam pipet damlalığı kullanın.

Mikroskop altında, katlanmamış hipokampusu, belirgin tarafı aşağı bakacak şekilde, CA3 alanı uzağa bakacak ve CA1 alanı araştırmacıya bakacak şekilde konumlandırın. Kayıt odasının kenarından bir vakum pipeti kullanarak hazne kuruyana ve doku dizi üzerinde durana kadar haznedeki solüsyonu dikkatlice aspire edin.

Ardından, katlanmamış hipokampusu dizinin üzerinde tutmak için dokunun üzerine özel yapım bir doku ankrajını dikkatlice yerleştirin. Kayıt odasını birkaç damla çözelti ile doldurun. IV damlama odasında akış hızını saniyede yaklaşık iki damlaya ayarlamak için girişi ve çıkışı kademeli olarak açın.

Kayıt odasındaki dokuyu normal aCSF ile yaklaşık bir dakika inkübe edin. Ardından, çözelti beslemesini 4-AP çözünmüş aCSF'ye geçirin ve akış hızını uygun şekilde ayarlayın. Kayıttan önce dokuyu 4-AP çözünmüş aCSF'de yaklaşık 5 ila 10 dakika inkübe edin.