JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:42 dk. • July 8th, 2025
Elektrolit çözeltisi içinde tel elektrotlu bir kayıt pipeti alın.
Pipeti hareketsiz hale getirilmiş bir beyin diliminin üzerine yerleştirin.
Arka plan sinyallerini azaltmak için pipet akımını ayarlayın.
Hedef nöronu bulmak için bir mikroskop kullanın ve pipeti nörona doğru hareket ettirin.
Hafif bir pozitif basınç uygulayın ve kilitleyin.
Pozitif basınç doku yüzeyini bozar ve hücreye yakınlığı gösterir.
Pipeti, zar üzerinde doğru konumlandırmayı gösteren bir çukur oluşana kadar yaklaştırın.
Pozitif basıncı serbest bırakın.
Hücre pipetle bir sızdırmazlık oluştururken dirençte bir artış gözlemleyin.
Stabilite için membran potansiyelini sabit bir negatif voltajda tutun.
Fazla basıncı gidermek için mikropipeti çekip çıkarın.
Doğruluk için pipetin hızlı ve yavaş elektrik tepkilerini ayarlayın.
Doğrudan bir elektrik bağlantısı kurarak hücreyi kırmak için kısa bir emiş uygulayın.
Tüm hücre voltaj kelepçesi konfigürasyonu artık elektrofizyolojik kayıt için hazırdır.
Tam hücre yapılandırması elde etmek için kayıt pipetini dilimin hemen üzerine yerleştirin ve pipet akımını Voltaj Kelepçesi modunda dengeleyin. Pipete hafif pozitif basınç uygulayın ve vanayı kilitleyin.
Daha sonra, sağlam bir zarı olan sağlıklı bir hücre seçin ve pipetle dokuya yaklaşın. Pozitif basınç, doku üzerinde hafif bir rahatsızlığa neden olmalıdır. Hücre yüzeyinde küçük bir çukur oluşana kadar pipeti çapraz hareketlerle yavaşça hücreye yaklaştırın. Ardından, pozitif basınç kilidini serbest bırakın. Hücre bir conta oluşturmaya başlayacak ve direnç bir gigaohm'un üzerine çıkacaktır. Voltaj kelepçesinde, hücreyi -68 milivoltta tutun.
Ardından, fazla basıncı gidermek için pipeti hücreden çapraz olarak hafifçe çekin. Hızlı ve yavaş pipet kapasitansını telafi edin. Hücreyi kırmak ve tam hücre konfigürasyonu elde etmek için pipet tutucuya bağlı tüpten kısa bir emme uygulayın.