Drosophila Retinal Fotoreseptörlerinin Işık Uyaranlarına Voltaj Yanıtlarının Elektrofizyolojik Kaydı

Bir Drosophila sineğini, başı açıkta kalacak şekilde bir tutucuya monte edin.

Bir gözde bir açıklık oluşturun ve retinayı ortaya çıkarmak için korneayı çıkarın.

Tutucuyu kayıt platformuna yerleştirin.

Kafa kapsülüne fizyolojik bir salin solüsyonu içeren künt bir referans elektrodu yerleştirin.

Daha sonra, açıklıktan retinaya hücre içi ortamı taklit eden bir çözelti içeren keskin bir kayıt elektrodu yerleştirin.

Gözün karanlığa uyum sağlamasına izin verin.

Kayıt için uygunluğunu sağlamak için kayıt elektrodunun direncini ölçün.

Ardından, kayıt ve referans elektrotları arasındaki temel voltaj farkını ortadan kaldırın.

Karanlık adaptasyon sırasında, retinal fotoreseptör hücrelerindeki spesifik iyon kanalları açık kalır ve sabit bir pozitif iyon akışına izin verir.

Işık çakmaları ile gözü uyarın.

Buna karşılık, iyon kanalları kapanır, pozitif iyon akışını azaltır ve akışı teşvik eder.

Sonuç olarak, fotoreseptörlerin membran potansiyeli, kayıt elektrodu tarafından voltajda bir düşüş olarak ölçülen daha negatif hale gelir.

Mikroelektrot amplifikatörünü çalıştırırken, statik yükleri önlemek için her zaman Faraday kafesinin veya titreşim önleyici masanın metal yüzeyine dokunarak topraklayın. Monte edilmiş sineği sinek hazırlama platformu direğine sabitleyin.

Sinek tutucuyu, sineğin sol gözü doğrudan araştırmacıya bakacak şekilde döndürün. Ardından, künt referans elektrodunu sineğin ocelli'sinden kafa kapsülüne nazikçe yerleştirmek için küçük, kaba bir mikro manipülatör kullanın. Sineğin hala sağlıklı göründüğünden ve antenlerini hareket ettirdiğinden emin olun. Hazırlık, kaydı hak etmek için mükemmel olmalıdır.

Şimdi, keskin kayıt mikroelektrodunu jöle kaplı açıklıktan sol göze sürün. Dokuya girerken, elektrot ucunun konumu yansıtma paterni ile belirgin olmalıdır. Kırılgan elektrot ucu mükemmel bir şekilde yönlendirilmelidir, aksi takdirde kırılır, bu çok zordur.

Kaydedilen hücre tipine bağlı olarak, sineğin kafası biraz farklı yönlendirilmelidir. Elektrotlar yerindeyken, mikroelektrot amplifikatörünü açın. Ardından soğuk ışık kaynağını kapatın, fişini prizden çekin ve toprak döngüsünün neden olduğu elektrik gürültüsünü en aza indirmek için merkezi toprağa bağlayın.

Ardından, deveboynu ışık kılavuzlarını, kardan kolu sistemi sinek etrafında serbestçe hareket ettirilebilecek şekilde ayarlayın. Ardından, sinek hazırlığını göreceli karanlığa geçirmek için oda ışıklarını kapatın. Şimdi, gözdeki kayıt elektrodunun direncini ölçün. 100 ile 250 megaohm arasında olmalıdır.

Ardından, amplifikatörü akım kelepçesine veya köprüsüne ayarlayın ve elektrotlar arasındaki voltajı sıfırlayın. Sinek birkaç dakika karanlığa adapte olduktan sonra, kayıt elektrot ucunu bir piezo step kullanarak veya ince çözünürlüklü düğmeyi hafifçe döndürerek 0,1 ila 1 mikronluk adımlarla göze sürün.

Her adımda, 1 ila 10 milisaniyelik bir ışık parlaması ile gözü uyarın. Her ışık yanıp sönmesi, voltajda veya ERG'de kısa bir düşüşe neden olur.