Bir fare beyin diliminde tek bir nöron sinapsında glutamat salınımının ve klerensinin analiz edilmesi

Oksijenli bir aCSF'ye batırılmış bir fare ön beyin dilimi içeren bir elektrofizyoloji kurulumuyla başlayın.

aCSF, sodyum-iyon kanallarını seçici olarak inhibe eden ve sodyumun neden olduğu nöronal uyarımı önleyen bir iyon kanalı blokeri içerir.

Kortikal nöronlar, floresan glutamat tespit sensör proteinlerini eksprese eder.

Postsinaptik nöronlarla bağlandığı bir kavşak olan sinapsta, uyarıcı bir nörotransmitter olan glutamat salgılayabilen tek bir presinaptik nöron aksonal bouton bulun.

Bu bouton'un yanına bir stimülasyon elektrodu yerleştirin ve depolarize edici akımlar uygulayın.

Bu, presinaptik nöronu uyararak kalsiyum iyonu akışına neden olur ve glutamat salınımını kolaylaştırır.

Seçilen bouton çevresinde floresan yoğunluğu kaydını başlatın.

Serbest bırakılan glutamat, post-sinaptik nöronlar üzerindeki sensör proteinleri ve reseptörleri ile etkileşime girer.

Bu arada, seçilen alanı lazer ışığıyla aydınlatın, glutamata bağlı sensör proteinlerinin floresan olmasına neden olun; artan floresan yoğunluğu glutamat salınımını gösterir.

Zamanla, glutamat sensör proteinlerinden ayrışır ve astrosite girer, bu da floresan yoğunluğunda bir azalmaya neden olarak glutamat klerensini gösterir.