Gerilime Duyarlı Bir Boya ile Boyanmış Beyin Dilimlerinde Nöronal Aktivitenin Optik Kaydı

Voltaja duyarlı bir boya veya VSD, nöronal zara entegre olan ve zar potansiyel değişikliklerine yanıt veren floresan molekülleri ile boyanmış hareketsiz hale getirilmiş bir fare beyni dilimini alın.

Dilimi bir kayıt odasına yerleştirin.

Temel voltaj referansı için toprak elektrodunu takın.

Ardından, uyarıcı ve kayıt elektrotlarını dilim üzerine yerleştirin.

Bir elektrik darbesi uygulayın.

Nabız, nöronları uyararak voltaj kapılı sodyum kanalı açılmasını ve sodyum iyonu akışını tetikleyerek bir zar potansiyel değişikliğine yol açar.

Bu, kayıt elektrodu tarafından ölçülen bir aksiyon potansiyelini indükler ve VSD'nin floresan özelliklerini değiştirir.

VSD'yi uyarmak ve floresan emisyonunu tetiklemek için beyin dilimini belirli bir dalga boyuna maruz bırakın.

Stimülasyon sonrası, voltaj kapılı potasyum kanalları açılırken sodyum kanalları kapanır ve potasyum iyonu akışını teşvik eder.

Bu, membran potansiyelini tekrar değiştirir ve sonuç olarak VSD'nin floresansını değiştirir.

Nöronal aktiviteyi görsel olarak temsil etmek için floresanı gerçek zamanlı olarak kaydedin.

Bu işleme başlamak için amplifikatörü, bilgisayarı ve kamera sistemini açın ve yazılımı açın. ACSF'yi 50 mililitrelik bir tüpe dökün ve karbojenle köpürtün. aCSF'yi dolaştırmak için peristaltik bir pompa kullanın ve akış hızını dakikada yaklaşık bir mililitreye ayarlayın.

Ardından, emme pipetinin yüksekliğini, deney odasının içindeki sıvı seviyesi her zaman sabit olacak şekilde ayarlayın. Toprak elektrodunu hazneye yerleştirin. Daha sonra, cam elektrodu az miktarda aCSF ile doldurun ve elektrot tutucusuna yerleştirin. Tutucuyu manipülatörün çubuğuna takın.

Bir amplifikatör kullanarak, elektrot direncinin yaklaşık 1 megaohm olduğundan emin olun. Kayıt oturumunda, nemli odadan bir dilimi deney odasına aktarın. Halkanın kenarını silikon O-ringe sıkıca bastırın. Zarı veya deney odasının altını kırmamaya dikkat edin.

Mikroskop altında, uyarıcı elektrotun ucunu ve alan potansiyeli kayıt elektrodunu dilimin üzerine yerleştirin. Bir uyaran vererek uyarılmış yanıtı kontrol edin. Görüş alanının optik kayıt sistemindeki sağ nöral devreyi kapsadığını onaylayın.

Ardından, uyarma ışığı yoğunluğunu kameranın maksimum kapasitesinin yaklaşık %70 ila %80'ine ayarlayın. Floresan ışık kaynağını kullanarak, odağı kayıt sistemi ile ayarlayın. Ardından, kaydı başlatın ve alımdan sonra verileri bir görüntü elde etme yazılımında analiz edin.