Farelerde Koku Alma Duyu Nöronlarının Delikli Yama-Kelepçe Kaydı

Genetik olarak tasarlanmış bir farenin kesik kafasını ele alalım. Burnundaki koku alma epiteli, florofor etiketli koku reseptörleri ile koku alma duyu nöronları veya OSN'ler içerir.

Cildi çıkarın ve septumu bağlı koku alma epiteli ile izole etmek için başı inceleyin.

Epiteli bir kayıt odasında ayırın ve sabitleyin.

Bir floresan mikroskobu kullanarak, OSN'lerin dendritik topuzunu hedeflemek için etiketli reseptörleri tespit edin.

Membran delici bir antibiyotik olan nistatin içeren hücre içi solüsyon içeren bir kayıt pipeti getirin.

Pipetin tıkanmasını önlemek için pozitif basınç uygulayın. Pipeti epitel içine yerleştirin ve bir OSN'ye yaklaşın.

Hücre zarı ile bir sızdırmazlık oluşturarak negatif basınca geçin. Membranı dinlenme potansiyelinde tutmak için akım uygulayın.

Nystatin, zarı delerek hücre içi iyonik akımların ölçülmesine izin verir.

OSN'nin yakınına koku uyarıcısı içeren bir pipet yerleştirin. Koku reseptörlerine bağlanan ve iyon akışına izin vermek için iyon kanalı açılmasını tetikleyen uyarıcıyı serbest bırakın. Elde edilen elektrofizyolojik sinyalleri kaydedin.

Bu protokol için, 2 ila 4 haftalık fareler bulundurun. Bu sunumda, OR/IRES/tauGFP eksprese eden fareler kullan