JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:27 dk. • July 8th, 2025
İmplante edilmiş bir optik fiber kanül ile serbestçe hareket eden bir fare ile başlayın.
Fiber optik yama kablosunun bir ucunu kanüle ve diğer ucunu bir uyarma ışık kaynağına bağlayın.
Fare, lateral hipotalamik alanda veya LHA nöronlarında yeşil florofor etiketli genetik olarak kodlanmış bir kalsiyum indikatörü veya GECI'yi ifade eder.
İmplante edilen optik fiber, LHA aksonlarının sonlandığı lateral habenula veya LHb bölgesine temas eder.
GECI'yi optimum uyarma dalga boyunda uyarın ve temel sinyali kaydedin.
Şimdi, caydırıcı bir stres tepkisi uyandırmak için fareye tekrarlanan hava püskürtücüleri uygulayın.
Bu uyaran, LHA akson terminallerinde aksiyon potansiyellerini tetikler, voltaj kapılı kalsiyum kanallarını açar ve kalsiyum akışına izin verir.
Hücre içi kalsiyum iyonları GECI'ye bağlanarak yeşil floresan emisyonunu artıran konformasyonel bir değişikliğe neden olur.
Optik sinyali görselleştirin.
Faredeki hava püskürmelerine yanıt olarak artan floresan, LHA-LHb yolunun caydırıcı sinyallerin iletilmesindeki rolünü doğrular.
Yama kordonunun liflerinin distal ucunu gözle ve mini bir lif mikroskobu ile inceleyerek başlayın. Liflerin yüzeyi çizilirse, ince taneli lif parlatma filmi kullanarak lifleri yeniden parlatın. Ardından, yama kablosunun distal uçlarını %70 etanol ve pamuk uçlu bir aplikatör ile temizleyin. Fiber optik kanülleri %70 etanol ve pamuk uçlu bir aplikatör kullanarak temizleyin.
Yama kablosunun yüksük ucunu, siyah bir shrink makaron ile kaplanmış seramik bir bölünmüş manşon kullanarak implante edilmiş fibere bağlayın. Bağlantı sırasında manşonun sıkı olduğundan emin olun. Hayvanın birkaç dakika iyileşmesine izin verin, ardından optik sinyali kaydetmeye başlayın ve deneyi çalıştırın. Kayıt sırasında, kaliteli kayıtlar elde etmek için canlı izlemeyi dikkatli bir şekilde izleyin ve manşonun yeterince sıkı olmadığını gösteren sinyalde herhangi bir sıçrama olup olmadığına dikkat edin.