JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:05 dk. • July 8th, 2025
Oksijenli aCSF ile perfüze edilmiş bir elektrofizyoloji kayıt odasında hareketsiz hale getirilmiş transfekte edilmiş bir fare beyni dilimi alın.
Bu dilim, bir floresan proteine kaynaşmış ışığa duyarlı iyon kanallarını ifade eden talamik nöronların akson terminallerini içerir.
Floresan talamik nöron aksonlarını görselleştirin ve bir piramidal nöron seçin.
Hücre içi bir çözelti içinde bir elektrot içeren bir kayıt pipetini hafif pozitif basınçla seçilen nörona doğru ilerletin.
Pozitif basınç, temas halinde nöronal zar üzerinde bir çukur oluşturur.
Yüksek dirençli bir conta oluşturmak için basıncı serbest bırakın.
Membran potansiyelini sabit bir negatif değere ayarlayın.
Zarı yırtmak için negatif bir basınç darbesi uygulayın ve tüm hücre konfigürasyonu elde edin.
Akson terminallerini aydınlatın, ışığa duyarlı kanalları aktive edin ve nöronal zarları depolarize edin, aksiyon potansiyellerini tetikleyin.
Uyarıcı nörotransmiterler salınır, kaydedilen nöron üzerindeki reseptörlere bağlanarak katyon akışına neden olur.
Nöronlar arasında doğrudan sinaptik bir bağlantı olduğunu gösteren ortaya çıkan uyarıcı post-sinaptik akımları kaydedin.
Tam hücre yama kelepçesi kaydı yapmak için, hipokampal kompleksi içeren bir beyin dilimini yavaşça kayıt odasına aktarın. Kayıt odasını dakikada 2 ila 3 mililitre karbojen ile köpürtülmüş 34 santigrat derece ACSF ile sürekli olarak perfüze edin. 4x büyütmede mavi LED aydınlatma ile ilgilenilen bölgedeki akson terminallerinde kronos GFP ifadesini kısaca inceleyin.
63x daldırma hedefine geçin ve odağı ayarlayın. Chronos GFP'yi ifade eden aksonları kontrol edin ve yama kaydı için piramidal bir nöron seçin. Ardından, bir pipeti potasyum glukonat bazlı dahili çözelti ile doldurun. Baş tablasındaki pipet tutucusuna monte edin. Hücreyi voltaj kelepçesi konfigürasyonunda yamalayın.
Tanımlanan nörona yaklaşın ve pipet ucunu nazikçe soma üzerine bastırın. Pozitif basınç, zar yüzeyinde bir çukur oluşturmalıdır. Ardından, bir giga ohm conta oluşturmak için basıncı serbest bırakın. Mühürlendikten sonra, tutma voltajını eksi 65 milivolta ayarlayın.
Membranı keskin bir negatif basınç darbesiyle kırın. Kronos ifade eden afferent liflerin 475 nanometre LED tüm alan stimülasyonuna akım veya gerilim kelepçesi postsinaptik yanıtları kaydedin. 20 hertz'de 2 milisaniye süreli 10 stimülasyonlu trenlerle uyarın.