Fare Omurilik Dilimlerinde Nöronal Ağların Mikroelektrot Dizisi Tabanlı Değerlendirmesi

aCSF içeren bir mikroelektrot dizisi veya MEA kuyusu alın. Bir fare omurilik dilimini kuyuya yerleştirin ve ağırlıklı bir ağ ile sabitleyin.

MEA kuyusunu bir kayıt sistemine yerleştirin. Mikroskop altında, MEA elektrotları ile internöronlar açısından zengin bir bölge olan yüzeysel dorsal boynuz veya SDH arasında maksimum temas sağlayın.

Dokuyu dengelemek için sürekli bir aCSF akışı sağlayın.

Nöronlar aksiyon potansiyelleri aracılığıyla iletişim kurar. Sodyum iyonu akışı zarı depolarize eder, ardından repolarizasyona neden olan potasyum iyonu çıkışı gelir. Membran kısaca hiperpolarize olur ve dinlenme potansiyeli geri yüklenene kadar yeni bir aksiyon potansiyelini önler.

MEA elektrotlarından spontan nöronal aktiviteyi kaydedin. Birden fazla elektrotta birlikte meydana gelen sinyaller, sinaptik olarak bağlı nöronlardan oluşan bir ağı gösterir.

Ağ boyunca artan aksiyon potansiyeli frekansına ve senkron ritmik aktiviteye yol açan depolarizasyonu uzatmak için bir potasyum kanal inhibitörü tanıtın.

Çakışan sinyalleri gösteren daha fazla elektrot, inhibitör aracılı senkron aktiviteyi gösterir.

Sırt boynuzu aktivitesini kaydetmeye başlamak için, yapay BOS ile doldurulmuş büyük uçlu bir Pasteur pipeti kullanarak dilimi inkübatörden MEA kuyusuna aktarın ve ek yapay BOS ekleyin.

Dilimi 60 elektrotlu kayıt dizisinin üzerine yerleştirmek için ince, kısa tüylü bir boya fırçası kullanın. Ardından, dokuyu yerinde tutmak ve MEA elektrotlarıyla iyi bir temas sağlamak için dokunun üzerine ağırlıklı bir ağ yerleştirin.

MEA'yı kayıt kafası aşamasına yerleştirin. Yüzeysel DAH altında mümkün olduğunca çok elektrotun olduğunu doğrulamak için ters çevrilmiş bir mikroskop kullanarak dokunun elektrotlar üzerindeki konumunu kontrol edin. En az iki ila altı elektrotun dilime temas etmediğinden emin olun.

Kamerayı cihaza bağladıktan sonra, analiz sırasında kullanmak üzere MEA'ya göre dilimin referans görüntüsünü alın. Ardından, kayıt yazılımında Start DAQ'a basın ve tüm elektrotların net bir sinyal aldığını onaylayın.

Ardından, perfüzyon giriş ve çıkış hatlarını yapay BOS ile iyi doldurulmuş MEA'ya takın ve perfüzyon sistemini açın. Akış hızını kontrol edin ve süper füzasyonun taşmasını önlemek için çıkış akışının yeterli olduğundan emin olun. Dokuyu beş dakika boyunca dengeledikten sonra, ham temel verileri beş dakika boyunca kaydedin.

Perfüzyon giriş hattını yapay BOS'tan 4-aminopiridin çözeltisine taşıyın ve 4-aminopiridin ile indüklenen ritmik aktivitenin kararlı duruma ulaşması için 12 dakika bekleyin. Ardından, beş dakikalık 4-aminopiridin kaynaklı aktiviteyi kaydedin ve ilaçları test etmek veya 4-aminopiridin stabilitesini kontrol etmek için sonraki kayıtlar için hazırlıklı olun.