JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:44 dk. • July 8th, 2025
Bir fare hipokampal-entorinal korteks dilimini batık bir kayıt odasına sabitleyin.
Doku canlılığını korumak için oksijenli ACSF'yi sabit bir sıcaklıkta sürekli olarak akıtın.
Entorinal korteksten bilgi alan nöronları içeren hipokampal CA3 bölgesinin stratum radiatumu içinde bir elektrolit çözeltisi ile doldurulmuş bir stimülasyon pipeti yerleştirin.
CA3'ten aksonal çıkıntılarla sinapslar oluşturan nöronlardan oluşan CA1 bölgesinin stratum piramidaline ACSF dolgulu bir kayıt pipeti yerleştirin.
Stimülasyon pipetini kullanarak, presinaptik CA3 nöronlarındaki aksiyon potansiyellerini tetiklemek için bir elektrik darbesi uygulayın.
Aksiyon potansiyeli, postsinaptik CA1 nöronları üzerindeki reseptörlere bağlanan nörotransmiterlerin salınmasını indükler. Bağlanma, iyon akışını indükleyerek membran potansiyelinde bir değişikliğe yol açar.
Yerel alan potansiyeli veya LFP olarak adlandırılan çoklu postsinaptik CA1 nöronlarının membran potansiyelindeki birleşik değişiklikler, kayıt pipeti tarafından hücre dışı olarak kaydedilir.
Yerel alan potansiyellerini kaydetmek için, 400 mililitrelik bir kabı karbojen kabarcıklı ACSF ile doldurun ve pompa hortumunun bir ucunu behere yerleştirin. ACSF'yi 400 mililitrelik beherden ısıtılmış bir rezervuara ve rezervuardan 32 santigrat derecede kayıt odasına yönlendirmek için dakikada sekiz ila 10 mililitre peristaltik bir pompayı açın.
Ardından, boruyu kısaca sıkıştırın ve akışı duraklatmak için pompayı kapatın. İnce forseps kullanarak, dokunun üzerinde durduğu lens kağıdının köşesinden bir beyin dokusu dilimini kayıt odasına aktarın, dilimleyin. Lens kağıdını soyun, dilimi kayıt odasına daldırılmış halde bırakın ve dilimi sabitlemek için bir arp kullanın.
Manuel bir mikromanipülatör kullanarak, sodyum klorür dolgulu bir stimülasyon pipetinin ucunu 30 ila 45 derecelik bir açıyla dilimin yüzeyine yavaşça ilerletin. Ardından, ACSF dolgulu bir yerel alan potansiyeli pipetinin ucunu 30 ila 45 derecelik bir açıyla ilgili bölgeye yavaşça ilerletmek için ikinci bir mikromanipülatör kullanın ve numunenin yerel alan potansiyelini standart protokollere göre kaydedin.