JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:18 dk. • July 8th, 2025
Bağlı sinirleri açıkta kalacak şekilde kesilmiş bir fare kulak kepçesi veya dış kulak ile başlayın.
Kayıt için tasarlanan siniri kayıt elektroduna yerleştirin.
Saç folikülü tabanını ortaya çıkarmak için kulak kepçesi kenarına yakın yağ tabakasını çıkarın, ardından stimülasyon için kılları ortaya çıkarmak için cildi katlayın.
Kıllara dokunmak ve saptırmak için mekanik bir stimülasyon probu yerleştirin.
Bu stimülasyon, duyusal sinir uçlarını aktive eder, mekanik olarak kapılı iyon kanallarını açar, pozitif iyon akışına izin verir ve aksiyon potansiyelleri oluşturur.
Aksiyon potansiyelleri bu uçlar boyunca kaydedilen sinire yayılır. Sinyali görselleştirin.
Ardından, bir floresan boya ekleyin ve saç stimülasyonuna devam edin.
Boya, uyarılmış nöronal zarlara bağlanır ve nöronal aktiviteyi etkilemeden endositoz yoluyla içselleştirilir.
Stimülasyon sonrası, bağlanmamış boyayı çıkarmak için yıkayın.
İçselleştirilmemiş membrana bağlı boyayı çıkarmak için bir kenetleme maddesi ekleyin.
Floresan mikroskobu kullanarak, mekanik olarak uyarılan sinir uçlarını tanımlamak için saç foliküllerindeki lekelenmeyi görselleştirin.
Uyaranla uyarılmış aksiyon potansiyellerinin kontrollü kayıtlarını yapmak için, seramik bir piezoelektrik aktüatöre bağlı, ateşle parlatılmış 10 santimetre borosilikat mikroelektrot camından mekanik bir prob kullanın. Probu, cilt kıvrımına paralel hareket edecek ve cilde değil tüylere dokunacak şekilde konumlandırın. Cilt yüzeyinin yaklaşık bir buçuk ila bir milimetre üzerine koyun. Ardından, prob hareket ettiğinde ses çıkışını dinleyerek stimülasyonu manuel olarak doğrulayın.
Şimdi, yazılımı küçük bir saç alanının mekanik stimülasyonunu sağlayacak şekilde ayarlayın. Örneğin, her 10 saniyede bir beş Hertz sinüzoidinde üç saniyelik stimülasyonlar programlayın. Bu, 200 ila 2000 mikron arasında bir prob yer değiştirmesi gerektirir. Ardından, sinirlerde kaydedilen yanıtların tutarlılığını kontrol etmek için tekrarlanan otomatik stimülasyon kullanarak devam edin. Tekrarlanabilir sonuçlar elde edilebilir olmalıdır.
Sonuçlar tutarlı olduğunda, tekrarlama oranını her 30 saniyede bir düşürün. Metin protokolünde daha fazla talimat verilmiştir. Mekanosensoriyel kanalların özelliklerini araştırmak ve saç foliküllerinin etrafındaki mekanosensoriyel terminalleri etiketlemek için, solüsyona 10 mikromolar FM143 ekleyin ve salınımlı prob ile kılları uyarmaya devam ederken 60 dakika bekletin.
Bu boya, kültürdeki duyusal nöronlarda ve koklea saç hücrelerinde aday dönüştürücü kanallarını bloke eder. Bununla birlikte, olgun saç folikülü afferentlerinde yerinde ateşlemeyi engellemez. Uçların etiketlenmesi, boyanın, boya maruziyeti boyunca mekanik stimülasyona yanıt vermeye devam eden terminaller olarak hareket ettiğini gösterir.