JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:23 dk • July 8th, 2025
Meyve sineği Drosophila'nın kontrolünü ve transgenik larvalarını elinize alın.
Transgenik larvalar, koku alma reseptörü nöronlarında veya ORN'lerde ışığa duyarlı bir iyon kanalını eksprese eder. Bu nöronlar, koku uyaranlarını algılayan ve sinyalleri beyne ileten ve uyaranlara yanıt olarak larva hareketini yönlendiren koku alma devresinin bir parçasıdır.
Larvaları bir davranış alanı içinde katılaşmış agarozlu bir tabağa yerleştirin ve tabağın üzerini örtün.
Larvaları, iyon kanallarını uyaran bir dalga boyuna maruz bırakın ve larva gezinme davranışını kaydedin.
Işık, optogenetik stimülasyon olarak bilinen iyon kanallarının açılmasını indükleyen ve katyon akışına izin veren bir kromofor olan all-trans-retinal'i aktive eder.
Akın, koku alma devresi boyunca sinyalleri ileten ve larva navigasyon davranışını etkileyen aksiyon potansiyelleri üretir.
Işığa duyarlı iyon kanallarına sahip transgenik larvalar, kontrol larvalarına kıyasla, çalışma uzunluğu olarak bilinen, yön değiştirmeden önce düz bir çizgide kat edilen mesafede bir değişiklik gösterir.
Davranış tahlili için, davranış odasında tutarlı bir sıcaklık ve nem sağlayın. 150 mililitre erimiş% 1.5 agarozu 22 santimetreye 22 santimetre karelik bir Petri kabına dökerek larva tarama ortamını hazırlayın.
Davranış tahlilinde kullanmadan önce agarozun Petri kaplarında 1 ila 2 saat katılaşmasına ve soğumasına izin verin. Agaroz katılaştıktan sonra, hazırlanmış üçüncü instar larvalarının en fazla 20'sini Petri kabının ortasına aktarın ve Petri kabını kapağıyla kapatın.
Petri kabını CCD kameranın altındaki davranış alanına yerleştirin. Videodaki larvaları görselleştirmek için 850 nanometre kızılötesi LED ışık kaynağını açın. Larva hareketini kaydetmek için CCD kamerayı başlatın. Son olarak, veri işleme ve analizine geçin.