Uzun Süreli İnkübasyondan Sonra Bir Fare Beyin Diliminde Nöral Aktivitenin Ölçülmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:55 dk. • July 8th, 2025
Uzun süreli inkübasyondan sonra oksijenli aCSF ile perfüze edilmiş bir fare beyin dilimini bir kayıt odasına sabitleyin.
Dilimdeki hücreler, hücre içi kalsiyum ölçümlerini kolaylaştıran bir kalsiyum indikatörü ile yüklenir.
Elektrolit çözeltisinde bir elektrot içeren bir kayıt pipeti alın.
Bir hedef nöron belirleyin. Kayıt pipetini hücre zarına pozitif basınçla yerleştirin ve bir çukur oluşturun.
Sıkı bir sızdırmazlık oluşturmak için negatif basınç uygulayın.
Ayrıca, negatif basınç darbeleri uygulayın, zarı yırtın ve tam hücre konfigürasyonu oluşturun.
Nöronun zarını depolarize eden yüksek potasyum konsantrasyonuna sahip perfuse aCSF.
Depolarizasyon, sodyum kanallarını açarak bir aksiyon potansiyelini tetikler, bu da voltaj kapılı kalsiyum kanallarını aktive eder ve kalsiyum akışına izin verir.
Kalsiyum iyonları göstergeye bağlanarak uygun aydınlatma altında görselleştirilebilen floresansı artırır.
Potasyum uygulamasını takiben kalsiyum akışının neden olduğu hücre içi floresanstaki artış, uzun süreli inkübasyondan sonra nöronal canlılığı gösterir.
Kayıt için, dokuyu mikroskop altında batık bir kayıt odasına yerleştirin ve dakikada 4 ila 5 mililitre akış hızında oksijenli aCSF ile p
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin