JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 3:20 dk • July 8th, 2025
Dengeli bir elektrolit çözeltisi içinde hareketsizleştirilmiş bir fare kolon segmenti içeren bir elektrofizyoloji kurulumu ile başlayın.
Kolon, kolondan beyne sinyaller ileten önceden disseke edilmiş bir kolon afferent duyusal sinir dalı ile açıkta kalan bir majör pelvik gangliona sahiptir.
Kolon, salin infüzyonu için üç vanalarla her iki uçta kanüle edilir.
Kayıt elektrodunu doldurun ve afferent sinirin yakınına yerleştirin.
Siniri elektrotun içine çekmek için hafif emme uygulayın ve sıkı bir sızdırmazlık sağlayın.
Temel sinir elektrik sinyalini ve kolonun iç basıncını izleyin.
Salini sürekli olarak kolona infüze ederken çıkış kanülündeki musluğu kapatın.
Bu, kolon içindeki basınçta kademeli bir artışa neden olur, bu da kolon şişkinliğine neden olur ve afferent siniri uyarır.
Sinir sinyalini ve kolon basıncını yeniden kaydedin.
Artan basınçla sinir sinyalinde kademeli bir artış, afferent sinir stimülasyonunu doğrular.
Diseksiyon mikroskobu altında önceden çekilmiş bir cam pipeti inceleyin. Elektrodun ucunu, kaydedilecek sinirin çapı ile uyumlu büyüklükte olacak şekilde bir pens ile kırın. Bunu takiben, ucu daha hafif bir parlamaya yakın yerleştirerek eğim verin.
Bu metodolojiye yeni olan kişiler, elektrotun ucunu sinirin boyutuyla uyumlu bir şekilde eğim vermeyi de zor bulabilirler.
Ardından, eğimli elektrodu elektrot tutucusuna yerleştirin. Ardından, elektroda negatif veya pozitif basınç uygulamak için tutucunun yan portuna 10 mililitrelik bir şırınga bağlayın. Bundan sonra, tutucuyu biyoamplifikatörün kafa aşamasına bağlayın ve kafa aşamasını bir manipülatöre monte edin.
Bunu takiben, elektrodu doku banyosuna taşıyın ve tutucunun gümüş teline temas edene kadar hafif emme uygulayarak elektrodu Krebs solüsyonu ile doldurun. Daha sonra, elektrot ucunu sinirin kesik ucuna yakın bir yere yerleştirin ve siniri elektrotun içine emmek için negatif basınç uygulayın. Ardından, sinirin yaklaşık 1 milimetresi elektrot içine çekilecek ve sıkı bir sızdırmazlık oluşturacak şekilde daha fazla negatif basınç uygulayın.
Şimdi, biyoamplifikatörü açın ve filtreyi 300 ila 3.000 hertz'e ayarlayın. Osiloskop üzerindeki sinyali izleyin ve sinir sinyalini ve intraluminal basınç sinyalini Spike Data işleme yazılımına kaydedin. Ardından, sürekli olarak intraluminal olarak infüze ederken çıkış kanülü üzerindeki üç musluğu kapatarak kolonun ramp distansiyonunu uygulayın. İntraluminal basıncı 60 milimetre cıvaya ulaşana kadar izleyin.