Bir Ex Vivo Fare Jejunum Segmentinde Mezenterik Afferent Sinir Aktivitesinin Kaydedilmesi

İnce bağırsağın bir parçası olan bir fare jejunumunun disseke edilmiş bir segmentini içeren, bir elektrolit çözeltisine batırılmış ve bir pim ile sabitlenmiş bir kayıt odası ile başlayın.

Jejunal segment, jejunumdan beyne sinyaller ileten önceden diseke edilmiş bir mezenterik afferent sinir ile çevreleyen yağ dokusunu içerir.

Segment, çözelti akışı için odanın giriş ve çıkış portlarına bağlanır.

Bir mikromanipülatöre ve bir kayıt ünitesine bağlı bir emme elektrodu alın.

Emme elektrodunu elektrolit çözeltisi ile doldurun ve mezenterik afferent sinirin yakınına yerleştirin.

Sıkı bir sızdırmazlık oluşturmak için siniri çevreleyen yağ dokusuyla çekmek için hafif bir emme uygulayın.

Jejunal segmentin iç basıncını ve gerginliğini kademeli olarak artırmak için girişi korurken çıkış portunu kapatın.

Bu, jejunum etrafındaki mezenterik afferent sinirin uyarılmasına neden olarak bir elektrik sinyali üretir.

Jejunal basınç değişikliklerine yanıt olarak afferent sinir aktivitesini kaydedin.

Bu prosedürde, bir mikromanipülatör kullanarak, emme elektrodunun ucunu organ banyosuna indirin. Ardından, elektrotun ucu Krebs çözeltisine batırılacak şekilde organ banyosundan bir miktar Krebs solüsyonunu nazikçe aspire edin. Krebs solüsyonunun emme elektrodunun içindeki tel elektrodu kapladığından emin olun.

Daha sonra, emme elektrodunun ucunu kesilen afferent sinir zincirinin hemen yanına yerleştirin ve kesilen sinir zincirini tüm uzunluğu boyunca kılcal damara çekin. Elektrotun ucunu yağ dokusuna doğru manevra yapın ve piston ile cam kılcal damara aspire edin, böylece kılcal damardaki siniri organ banyosunun içeriğinden mekanik olarak sızdırmaz

hale getirin.

Afferent sinir aktivitesinin kaydını doğrulamak için, bağırsak segmentinde kademeli bir basınç artışına yol açmak için çıkış portunu kapatarak afferent ateşlemede rampa distansiyonunun neden olduğu bir artış gerçekleştirin. İstenen deneysel protokolü, yalnızca art arda üç rampa distansiyonu tekrarlanabilir çok üniteli bir deşarj sağladığında gerçekleştirin.