Elektrofizyolojik Kayıt için Bir Fare Beynine Bir Elektrot Düzeneğinin İmplantasyonu

Anestezi uygulanmış bir fareyi, vücut ısısını korumak için bir ısıtma yastığı içeren stereotaksik bir çerçeveye sabitleyin.

Gözlerin kurumasını önlemek için kayganlaştırıcı uygulayın ve hidrasyonu korumak için deri altına bir elektrolit çözeltisi enjekte edin.

Kürkü kafa derisinden çıkarın, bölgeyi dezenfekte edin ve ağrıyı azaltmak için deri altına analjezik enjekte edin.

Kafatasını ortaya çıkarmak için bir kesi yapın, ardından beyin bölgelerini tanımlamak için anatomik yer işaretlerini görünür hale getirmek için temizleyin.

Diş yapıştırıcısı uygulayın ve elektrot implantasyonuna yardımcı olmak için bir kürleme ışığı kullanarak sertleştirin.

Hipokampus ve beyincik üzerinde delikler açın ve stereotaksik çerçeve üzerine bir tutucu kullanarak bir elektrot düzeneği monte edin.

Bipolar elektrotlar hipokampal aktiviteyi kaydederken, bir referans elektrot beyincikten temel aktivite elde eder.

Elektrotları yerleştirin, tertibatı diş çimentosu ile sabitleyin ve tutucudan çıkarın.

Elektrolit çözeltisini ve bir analjeziki tekrar uygulayın.

Elektrofizyolojik kayıt yapmadan önce farenin tamamen iyileşmesine izin verin.

Ameliyata devam etmeden önce, 8 haftalık VGAT-Cre farelerinin ağırlığını kaydedin. Ardından, anesteziyi indüklemek için hayvanı bir indüksiyon odasına yerleştirin. Anestezi uygulanmış fareyi 37 santigrat derecede bir ısıtma yastığına yerleştirin. Geri besleme kontrollü bir sıcaklık sistemi kullanılıyorsa, ameliyat sırasında sıcaklığın izlenmesi için sıcaklık probunu hayvanın rektumuna yerleştirin. Ameliyata başlamak için, inhalan anestezi akışını burun konisine yönlendirin ve ön üst dişleri kesici bara nazikçe yerleştirerek hayvanı stereotaksik çerçeveye monte edin ve koniyi burnunun üzerine hareket ettirin, ardından kulak çubuklarını kulaklara yerleştirin ve stereotaksik çerçeveye yapıştırın.

Hayvanın başının düz ve ortalanmış olduğundan ve hafifçe problandığında hareket ettirilemeyeceğinden emin olun. Hayvan monte edildikten sonra, hidrasyon için farelere 0,5 mililitre normosol enjekte edin ve kornea kurumasını önlemek için oküler kayganlaştırıcı uygulayın. Arka bacak parmağını sıkıştırarak anestezi derinliğini izleyin. Hayvanda geri çekilme refleksi yoksa, farenin kafa derisi kıllarını cerrahi alanın etrafına çıkarmaya devam edin. Bittiğinde, temiz cilt bölgesini alternatif bir etanol ve iyot ile iyot bitirme uygulamasıyla üç kez dezenfekte edin ve deri altına 0.05 mililitre% 0.25 bupivakain enjekte edin.

Bir neşter kullanarak kafatası üzerinde bir kesi yapın ve ardından kafatasını açığa çıkaran cerrahi makasla cildin bir kısmını kesin. Kafatasını pamuklu çubukla alttaki tüm dokulardan temizlemeden önce cildi bir kenara itin. Steril pamuklu çubuklar kullanarak kafatasını hidrojen peroksit ile temizleyin ve kafatası dikişlerini, bregmayı ve lambdayı görünür hale getirin. Stereotaksik olarak monte edilmiş matkapla, matkap ucunu bregma ve sıfır x, y ve z koordinatlarına getirin, ardından kafanın düz olup olmadığını belirlemek için koordinatlarını belirlemek için matkabı lambda konumuna kaldırın ve hareket ettirin.

Kafatasını iyice kuruttuktan sonra, aplikatörle bir damla kendiliğinden aşındıran diş yapıştırıcısı uygulayın. Diş yapıştırıcısını diş UV ışığı ile kürlemeden önce 60 saniye bekleyin 40 saniye. Parlak bir yüzey, yapıştırıcının kafatası ile etkili bir şekilde çapraz bağlandığını gösterir. 0,031 inçlik bir matkap ucunun yardımıyla, beyni delmekten kaçınarak, dakikada 5.000 dönüşte veya RPM'de kafatasına iki taraflı olarak iki delik dikkatlice delin. Çapak deliklerinin delinmesini geliştirmek için bir damla tuzlu su sürün. Hipokampal derinlik elektrotlarının implantasyonu için, bregmadan 3 milimetre posterior ve 3 milimetre lateral olarak delin

Referans elektrot için beyinciğin üzerinde, lambdanın arkasında 6 milimetre arkada ve bregmadan 0 milimetre yanda bir çapak deliği açın. Ardından, monte edilmiş elektrotlara sahip altı pimli kaideyi stereotaktik bir çerçeve üzerindeki elektrot tutucusuna monte edin. Elektrotları karşılık gelen çapak deliklerinin üzerine hizalayarak, iki bipolar elektrot ucunu sol ve sağ hipokampal çapak deliklerinin tam üstüne yerleştirmek için kulaklığı yavaşça indirin ve gezinin ve gerekirse referans elektrodu deliğin üzerinde, beyincik üzerinde asılı kalacak şekilde ayarlayın.

Hipokampal büküm elektrotları deliklerin tam üzerinde olduğunda, z eksenini sıfırlayın ve elektrotu yavaşça sağ ve sol hipokampusun içine eksi üç milimetreye indirin ve referans elektrodu beyincik üzerindeki deliğe yönlendirin. Toz ve sıvıyı bir karıştırma kabında karıştırarak diş çimentosunu hazırlayın, ardından kafatası yüzeyini, elektrotları ve kafatası yüzeyi ile kaidenin tabanı arasındaki boşluğu diş çimentosu ile kaplayın.

Çimento kuruduktan ve sertleştikten sonra, elektrot tutucuyu stereotaktik koldan ayırın, kolu kaldırın ve tutucuyu kaideden çıkarın. Fareyi deri altından ketoprofen ve normosol ile uyguladıktan sonra, hayvanı vivaryum kafesindeki ısıtılmış pedin üzerine taşımak için hayvanı stereotaktik çerçeveden çıkarın. Tamamen uyandıktan sonra, tek hayvanı vivaryum kafesine geri koyun, hayvanı yumuşak yiyeceklerle besleyin ve ameliyattan 72 saat sonrasına kadar günlük kilo kaybını izleyin.