Bir Fare Serebral Endotelyumunda Hücre İçi Kalsiyum ve Membran Potansiyelinin Eş Zamanlı Ölçümü

Bir fare posterior serebral arterinin segmentlerini alın.

Hücreleri gevşeterek doku matrisini parçalamak için bir enzim çözeltisi ile inkübe edin.

Çözeltiyi bir tamponla değiştirin, ardından bir segmenti bir kayıt odasına aktarın.

Bağ dokusunu ve düz kas hücresi katmanlarını mekanik olarak ayırın ve alttaki endotel tüpünü izole edin.

Tüpü sabitleyin, ayrışmış katmanları çıkarın ve fizyolojik bir tampon ekleyin.

Odayı sürekli tampon akışı olan bir kayıt sistemine yerleştirin.

Endotel hücrelerine giren bir floresan kalsiyum indikatörü yerleştirin, ardından bir hücreye bir kayıt elektrodu yerleştirin.

Kalsiyum iyonu akışını tetikleyen ve endoplazmik retikulumdan kalsiyum salınımı için aşağı akış sinyalini indükleyen bir ilaç uygulayın.

İndikatör kalsiyuma bağlanır ve uyarıldığında floresan yayar.

Kalsiyum artışı, kalsiyuma bağımlı potasyum kanallarını aktive ederek potasyum çıkışına neden olur ve membran potansiyelini değiştirir.

Elektrot kullanarak floresan sinyali ve membran potansiyeli aracılığıyla hücre içi kalsiyumdaki değişiklikleri aynı anda kaydedin.

Bu prosedürde, bir mikroskop, bir kamera ve bir oda ve mikromanipülatörler tutan bir alüminyum sahne kullanarak öğütme aparatını