Cerrahi Olarak İnterve Edilmiş Bir Fare Modelinde Duyusal Sinir Fonksiyonunun Test Edilmesi

Sırt derisi açıkta olan anestezi uygulanmış bir fare ile başlayın. Alanı dezenfekte edin ve üzerini örtün.

Boyundan kuyruğun hemen üstüne kadar orta hat kesisi yapın.

Bir cilt flebi oluşturmak ve alttaki dokuyu ortaya çıkarmak için sol taraftaki cildi çekin.

Fareyi bir mikroskop altına yerleştirin ve duyusal sinirleri bulun.

Kan damarlarını bozmadan bu sinirleri dikkatlice çekin ve çıkarın.

Dokuyu nemlendirin ve kalan sinirleri deri flebinden çıkarın, denerve bir alan oluşturun.

Sağ tarafta, kontrol olarak sinirleri sağlam bırakın. Cilt kesisini dikin.

Farenin iyileşmesine izin verin.

Ameliyattan birkaç hafta sonra stabil denervasyonu değerlendirmek için, traşlı sırt derisi ile aynı denerve fareyi kullanın.

Bir iğne kullanarak, kontrol alanına batırın ve mekanik bir stimülasyon oluşturun.

Bu, altta yatan sinirleri uyarır, beyne bir sinyal gönderir ve farenin yanıt vermesine neden olur.

Bununla birlikte, denerve edilmiş alanın delinmesi, duyusal sinirlerin rolünü doğrulayan bir yanıt üretemez.

Hayvanı uyuşturun. Tüm sırt derisini tıraş edin ve biyopsi işlemine benzer şekilde alanı temizleyin. Şimdi, boynun tabanından dorsal orta hat boyunca kuyruğun yaklaşık yarım santimetre yukarısına kadar steril bir neşter kullanarak bir kesi yapın. Steril künt forseps kullanarak, boynun yakınındaki skapular yağ yastıkçıklarından arka bacağın hemen üstüne kadar altta yatan dokuyu görselleştirmek için sol taraftaki cildi yanlardan uzağa nazikçe yansıtın.

Şimdi, diseksiyon ışık mikroskobu altında dorsal kutanöz sinirleri tanımlayın. Bunlar, keskin kıvrımlar yapmadan ve cildin altındaki gevşek bağ dokusuna girmeden önce gövde duvarının yarı saydam fasyasından kaudal olarak geçen beyaz iplikler olarak görünür. Daha sonra, ultra ince forsepsler kullanarak, T3 ila T12 anatomik bölgelerinde bulunan hayvanın sol tarafından sinirleri, segmentlerinin gövde duvarında büküldüğü yerden deriye giriş bölgelerine kadar kopararak çıkarın.

Forsepsleri dikey olarak yönlendirin ve sinirleri bükülme bölgelerinin yaklaşık yarım santimetre altında kavrayın. Bir kez kavrandıktan sonra, sinirin gerilmesini ve onları çıkarmak için çevredeki dokudan ayrılmasını sağlamak için yukarı doğru çekin. Bitişik kan damarlarına zarar vermekten kaçının. Periyodik olarak% 0.9 steril salin solüsyonu damlaları uygulayarak dokuyu işlem boyunca nemli tuttuğunuzdan emin olun.

Gövde duvarından cilde uzanan tüm sinirleri çıkarmaya devam edin, ancak gövde duvarının yoğun fasyası içindeki sinirleri bozmayın. Ardından, açıkta kalan cilt flebindeki tüm sinirleri çıkarın. Bu lifler, dorsal kutanöz sinirlerin distal dallarını içerir ve cilt flebinin dermal tarafındaki bağ dokusu içinde sporadik olarak yerleştirilmiş beyaz dallanan iplikler olarak görünür.

Bu ince dalları çıkarmak için, forsepsleri dermal yüzeye kabaca paralel olarak konumlandırın, sinirleri kavrayın ve yukarı doğru koparın. Bu şekilde görünen tüm sinirleri çıkarın. Kan damarlarını ve cildi delmeyin.

Bu adım sırasında, komşu kan damarlarının yırtılmasını önlemek önemlidir. Bitişik bir kan damarı olan bir sinir bulursanız, bitişik damarın olmadığı bir alana ventral olarak takip edin ve kopararak çıkarın.

Şimdi, dorsal orta hat kesisinin sağ tarafındaki cildi künt bir şekilde yansıtın, ancak herhangi bir siniri çıkarmayın. Bu, kontralateral sahte kumandalı kontrol görevi görecektir. Son olarak, hayvanı dikin ve daha önce olduğu gibi ameliyat sonrası izleyin. Daha sonra, ameliyattan haftalar sonra stabil sinir kaybını doğrulamak için, steril bir hipodermik iğne kullanarak denerve edilmiş bölgeyi nazikçe delin. Hayvanın tipik olarak titreyerek mi yoksa başını çevirerek mi tepki verdiğine dikkat edin. Deri bölgesi stabil bir şekilde denerve edilmişse, hayvan çok az tepki gösterecek veya hiç tepki göstermeyecektir.