JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:06 dk. • July 8th, 2025
Beyaz gözlü bir Drosophila sineğini bir kayıt alanındaki bir sahibine sabitleyin.
Sineğin yakınına bir ışık kaynağı yerleştirin.
Toprak elektrodunu sineğin sırtına implante edin.
Kayıt elektrodunu, sineğin gözünün dış çevresine, bir fotopigment içeren retinal fotoreseptör hücrelerinin yanına yerleştirin.
Karanlığa - sineği kısaca uyarlayın. Bu, fotopigmentin ışıkla aktive olan formu olan metarhodopsin'i inaktif formu olan rodopsine dönüştürür.
Yüksek yoğunluklu turuncu ışık darbesi uygulayın. Bu, kalan herhangi bir metarhodopsin'i rodopsine dönüştürür.
Ardından, mavi ışık darbeleri uygulayın. Mavi ışık, rodopsini metarhodopsine dönüştürerek bir sinyal kaskadı başlatır ve belirli iyon kanallarını açar.
Bu, mavi ışık çıkarıldıktan sonra bile sürekli bir pozitif iyon akışına ve sürekli depolarizasyona neden olur - elektrot tarafından kaydedilen uzun süreli depolarize edici son potansiyel veya PDA.
Şimdi, metarhodopsin'i rodopsine dönüştürmek için turuncu ışık darbelerini yeniden uygulayın.
Bu, sinyal kaskadını durdurur, PDA'yı sonlandırır ve fotoreseptör zarını yeniden polarize eder.
Sinek tutucuyu bir mıknatıs bloğu üzerindeki karanlık bir Faraday kafesine yerleştirin ve sineğin ışık kılavuzunun ucundan yaklaşık beş milimetre uzakta olduğundan emin olun. Mikromanipülatörleri kullanarak kayıt elektrodunu sineğin gözünün üzerine ve toprak elektrodunu sineğin üst sırtının üzerine yerleştirin. Ardından, mikromanipülatörleri kullanarak toprak elektrodunu sineğin arkasına yerleştirin.
Kayıt elektrodunu, tercihen mikromanipülatörleri kullanarak sineğin gözünün dış çevresine yerleştirin. Faraday kafesini kapatın ve beş dakika boyunca karanlığa uyum sağlamak için odadaki ışıkları kapatın. Saniyede 500 metrelik bir darbe süresinden, 60 saniyelik bir darbe aralığından ve altıya ayarlanmış darbe sayısından başlayarak parametreleri girin.
PDA'yı ölçmek için, ana hız darbe üretecini Tren modunda ayarlayın. Ardından, turuncu bir filtre kullanarak maksimum yoğunlukta 5 saniyelik bir ışık darbesi verin. Voltaj yanıtını kontrol edin. Turuncu filtreyi geniş bantlı mavi filtreyle değiştirin ve maksimum yoğunlukta üç adet 5 saniyelik ışık darbesi verin. Voltaj yanıtını kontrol edin.
Karanlıkta en az 60 saniye bekleyin. Mavi filtreyi önceki turuncu filtreyle değiştirin. Ardından, 60 saniyelik aralıklarla 5 saniyelik iki ışık darbesi verin. Voltaj yanıtını kontrol edin.