Akut Hipokampal Dilimlerde Nöronal Alan Uyarıcı Postsinaptik Potansiyellerin Kaydedilmesi

Bir fare hipokampal dilimini yapay beyin omurilik sıvısı veya aCSF ile doldurulmuş bir daldırma odasına yerleştirin.

Hareketi önlemek için dilimi bir tutma ağı ile sabitleyin.

Nöronal canlılığı korumak için oksijenli aCSF'yi sürekli olarak dolaştırın.

Sabit bir voltaj referansı sağlamak için referans elektrotları takın.

Stimülasyon ve kayıt elektrotlarını hipokampal CA1 stratum piramidal ile aynı hizada ve paralel olarak konumlandırın.

Elektrik darbeleri uygulayın.

Bu darbeler nöronları uyararak voltaj kapılı iyon kanallarının açılmasına neden olur, pozitif iyonların içeri girmesine izin verir ve aksiyon potansiyellerini tetikler.

Bu aksiyon potansiyelleri nöronlar boyunca yayılır ve uyarıcı nörotransmiterlerin sinaptik yarığa salınmasını indükler.

Nörotransmiterler, postsinaptik nöronlar üzerindeki spesifik reseptörlere bağlanarak pozitif iyon akışına izin verir ve membran potansiyelinde bir değişikliğe neden olur - uyarıcı postsinaptik potansiyel veya EPSP.

Kayıt elektrodu, EPSP'yi kayıt bölgesindeki bir nöron popülasyonundan ölçer - EPSP alanı.

Küçük bir lens temizleme kağıdı parçasını ve U şeklinde bir platin tel üzerine sabitlenmiş bir naylon ağı daldırma dilimi haznesinde birkaç dakika önceden ıslatın. Bundan sonra, U şeklindeki platin teli çıkarın. Geri dönüşümü kapatın ve lens temizleme kağıdına bir dilim yerleştirin. Ardından, dilim tutma ağını hemen dilimin üzerine yerleştirin.

Pompayı açın ve hedefi ACSF'ye daldırmadan dilimin 30 dakika boyunca dengelenmesine izin verin. Bu arada, kayıt elektrodunu ACSF ile doldurun ve pipet tutucusuna monte edin.

Ardından, test edilmiş epoksi yalıtımlı tungsten stimülasyon elektrodunu manipülatör tutucusuna ve referans telini dilim haznesine yerleştirin. Hazneye ikinci bir referans elektrodu ekleyin ve bunu kayıt elektrodunun baş aşamasının referans soketine bağlayın.

Amplifikatör kontrol yazılımında, Sıfır-kelepçe Modu kutusuna tıklayın, ardından Çıkış Kazancı Listesi kutusuna çift tıklayın. 100'lük bir kazanç seçin. Yüksek Geçişli Filtre Kutusu bessel'e çift tıklayın. 3 kilohertz'i seçin ve 0,1 hertz'i seçmek için Düşük Geçişli Filtre Liste Kutusu AC'ye çift tıklayın.

Kayıt yazılımında, Açık Protokol Al'a tıklayın. Epizodik stimülasyonlara ve 50 ila 100 milisaniye boyunca 10 ila 20 kilohertz'de güçlendirilmiş potansiyellerin dijitalleştirilmesine izin veren ayarlara sahip ve epizodik bir kaydın başlamasından 10 milisaniye sonra otomatik olarak bir uyaran izolatörünü tetikleyen bir protokol seçin.

Stimülasyon ve kayıt elektrotlarını stratum pyramidale ile aynı hizada ve paralel olarak yerleştirin. Ardından, Düzenleme Protokolünü Al'a tıklayın ve açılır pencerede Tetikleyici sekmesini seçin. Tetikleyici Kaynak kutusuna tıklayın ve tetikleyici kaynağı olarak Boşluk Çubuğu'nu seçin. Ardından, tıklayın OK düğmesine tıklayın ve Rekor edinmeyi başlatmak için düğmesine basın.

Uyaran izolatör yazılımında Voltaj Kontrol Kutusuna tıklayın ve sıfır girin. İndir düğmesine tıklayın. Bunu takiben, Kayıt Yazılımı penceresine tıklayın ve boşluk çubuğuna basın. Sırayla 1.000 ile 8.000 arasında değerler girerek bu döngüyü tekrarlayın. Stimülasyon gücünü FEPSP eğim değerleriyle ilişkilendirin ve FEPSP eğiminin maksimum% 40'ını elde etmek için gereken stimülasyon gücünü belirleyin. Voltaj Kontrolü kutusuna tıklayın ve belirlenen değeri girin. Ardından, İndir düğmesini tıklayın.

Kayıt yazılımında, dur düğmesine ve ardından Satın Al menüsüne tıklayın. Protokolü Düzenle'ye tıklayın ve açılır pencerede Tetikleyici sekmesini seçin. Daha sonra, Tetikleme Kaynağı kutusuna tıklayın ve tetikleyici kaynağı olarak Dahili Zamanlayıcı'yı seçin. Tıkla OK düğmesine ve ardından Rekor her 60 saniyede bir alan potansiyellerinin otomatik kaydını başlatan düğme. 30 ila 60 dakika sonra Durdur düğmesine tıklayın.

Kayıt yazılımında, Açık Protokol Al'ı tıklatın ve temel kayıtla aynı protokolü seçin. Tamam düğmesine tıklayın ve sonra Kaydet'e tıklayın. Saha potansiyel kayıtlarını iki ila dört saat boyunca otomatik olarak çalıştırmaya devam edin. Tamamlandığında, kaydı sonlandırmak için Durdur düğmesine tıklayın.