JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:53 dk. • July 8th, 2025
Yeni doğmuş bir kemirgenden beyin sapı-omurilik preparatını oksijenli aCSF akışı olan bir kayıt odasında sabitleyin. Preparatı kaplayan ince dokuyu çıkarın.
Beyin sapının nöronal ağı, nefes almayı kontrol etmek için omuriliğin dördüncü ventral veya C4 sinir kökünün motor nöronları aracılığıyla iletilen, inspiratuar patlama adı verilen ritmik bir elektriksel aktivite üretir.
Sinir kökünün yakınına bir kayıt pipeti yerleştirin ve kökü içeriye çekmek için emme kullanarak bir sızdırmazlık oluşturun.
Beyin sapı nöronlarının içsel özellikleri, zarı depolarize eden ve bir aksiyon potansiyeli oluşturan sodyum akışına neden olur, ardından repolarizasyon için potasyum çıkışı gelir.
Ardından gelen hiperpolarizasyon, sodyum-potasyum ATPaz, membran potansiyelini geri kazanmak için ATP'yi kullanana kadar yeni aksiyon potansiyellerini önler.
Aksiyon potansiyelleri ritmik patlamalar halinde sinir köküne yayılır.
ATP üretimini bozmak ve ATPaz fonksiyonunu bozmak, aksiyon potansiyellerini geciktirmek ve ritmik patlamaları azaltmak için oksijenden yoksun aCSF'yi akışlayın.
Oksijenli aCSF'ye geri dönmek, ritmik patlamaların sayısını geri kazandırır.
Bu prosedürde, sinir dokusunu ventral tarafı yukarı bakacak şekilde kayıt odasına yerleştirin. Omuriliğin en alt kısmındaki pimlerle ve beyin sapının en rostral kısmıyla sabitleyin. Bundan sonra, sinir dokusunun yüzeyini kaplayan ince bir doku olan araknoid zarı çıkarın. Sinir dokusunun pia mater ve kan damarlarını çıkarmamaya dikkat edin. Ardından, elektrodu ACSF ile doldurun.
Bir mikromanipülatör kullanarak, elektrodu dikkatlice dördüncü ventral kökün yakınına yerleştirin. Şırıngayı kullanarak sinir kökünü nazikçe aspire edin. Ardından, sinir kökü ile elektrodu omuriliğe yerleştirin. Daha sonra, preparatın temel parametrelerini belirlemek için normoksik koşullar altında sinir dokusu tarafından üretilen elektrofizyolojik aktiviteleri en az 20 dakika boyunca kaydedin.
Perfüzyon solüsyonunu karbojen kabarcıklı ACSF'den hipoksi uyaran ACSF'ye geçirin ve 15 dakika boyunca kaydedin. Bundan sonra, perfüzyon solüsyonunu standart karbojen kabarcıklı ACSF'ye geri getirin ve kaydı bitirmeden önce en az 15 dakika daha kaydedin.