Hipokampal Beyin Diliminde Tetanik Stimülasyonlar Kullanılarak Lokal Cornu Ammonis 1 (CA1) Gama Salınımlarının Oluşturulması

N-metil-D-aspartat veya NMDA glutamat reseptörlerini bloke eden yüksek magnezyum içeren sürekli bir aCSF perfüzyonu ile bir kayıt odasında bir beyin dilimini sabitleyin.

Uyarıcı ve kayıt elektrotlarını hipokampal Cornu ammonis 1 veya CA1 stratum radiatum'a yerleştirin.

Sağlam nöronal bağlantıları onaylayan bir elektrik sinyali elde etmek için uyarın.

Uyarıcı elektrodu stratum oriens'e ve kayıt elektrodunu stratum pyramidale'ye yeniden konumlandırın, ardından daha derine yerleştirin.

Schaffer kollateral aksonlarından uyarıcı nörotransmitter glutamat salınımını indüklemek için tetanik stimülasyonlar, yüksek frekanslı elektrik darbeleri uygulayın.

Glutamat, CA1 nöronları üzerindeki glutamat reseptörlerine bağlanarak sodyum akışını ve membran depolarizasyonunu kolaylaştırır.

Bu, NMDA reseptörlerinin blokajını kaldırarak sodyum ve kalsiyum akışına izin verir ve nöron uyarımını arttırır.

Stratum oriens'teki uyarılmış internöronlar, CA1 nöronları ile etkileşime girerek inhibitör nörotransmitter GABA'yı serbest bırakır.

Uyarıcı ve inhibitör girdilerin bu dengesi, CA1 nöronal ağının senkronize kontrollü uyarılmasına yol açar ve dikkat ve hafıza için çok önemli olan gama salınımları adı verilen ritmik beyin dalgaları üretir.

Dilimi kayıt odasına monte etmek için, dakikada 1 ila 2 mililitre akan ve 32 santigrat dereceye kadar ısıtılan ACSF ile perfüze edilmiş batık bir kayıt odasına bir beyin dilimi yerleştirin. Kayıtlar için kullanılan ACSF, magnezyum konsantrasyonu 2 milimolar'dan 4 milimolar'a yükseltildiği için tutma odasındakinden farklıdır.

Telleri hipokampal CA1'e paralel olacak şekilde üzerine yarı dairesel paslanmaz çelik bir ağırlık koyarak dilimi sabitleyin. Bundan sonra, perfüzyon hızını 32 santigrat derecede dakikada 8 ila 10 mililitreye yükseltin.

Bir diseksiyon mikroskobu kullanarak, uyarıcı elektrodu stratum oriens'in ortasına hareket ettirin. Ardından, kayıt elektrodunu, uyarıcı elektroda mümkün olduğunca yakın piramidal katmana hareket ettirin. Daha sonra, 120 ila 150 mikroamper test darbesine yanıt olarak 1 milivoltluk alan EPSP'sini oluşturmak için hem uyarıcı hem de kayıt elektrotlarını dilime 50 ila 100 mikrometre indirin.

Gama salınımları oluşturmak için, dokuyu 200 hertz'de verilen 20 kez 0.1 milisaniyelik darbelerden oluşan bir trenle uyarın. Bu tetanik uyaran, her 5 dakikada bir verildiğinde tekrarlanabilir tepkiler verebilir.