Bir farede retina pigment epitelinin doğrudan bağlı elektroretinogram kaydı

Karanlığa adapte edilmiş, anestezi uygulanmış bir fare ile başlayın.

Korneaya anestezik ve dilatasyon damlaları uygulayın.

Fareyi, loş kırmızı ışıklı bir kubbenin önündeki yükseltilmiş bir platforma yerleştirin.

Arka bacağa deri altından bir toprak elektrodu ve ağız içine bir referans elektrodu sabitleyin.

Tuz çözeltisi ile doldurulmuş bir kılcal damar ile bir elektrot tutucu alın. Hava kabarcıklarını gidermek için hafifçe vurun.

Kılcal damar ucunu tuz çözeltisiyle tamamen doldurun.

Doğrudan bağlı bir elektroretinogram veya DC-ERG kaydetmek için kılcal damarı kornea üzerine yerleştirin.

DC-ERG, retina pigment epitelinin veya RPE'nin ince elektriksel tepkilerini ölçer.

RPE, fotoreseptör hücrelerin sağlığını ve yapısal bütünlüğünü koruyan özel bir hücre tek tabakasıdır.

İletkenliği korumak ve kurumayı önlemek için bir damla göz kayganlaştırıcı uygulayın.

Benzer ve aralık içinde olduklarından emin olmak için her bir gözün direnç değerlerini kontrol edin.

İstikrarlı bir taban çizgisi oluşturun ve ardından DC-ERG'yi kaydetmeye başlayın.

Fareyi ve elektrotları bir deney için konumlandırmak için, korneayı %2,5 Fenilefrin HCl ve %0,5 tropikamid damlası ile genişletmeden önce sedasyonlu bir farenin korneasını %0,5 Proparakain Hidroklorik asit damlası ile uyuşturun.

Kubbenin içinde loş kırmızı ışığı açmak için altılı adımdan birinci adımını kullanın ve fareyi ısıtılmış bir kayıt masasının üzerine yerleştirin. Arka bacağın derisini dikkatlice kapatmak için forseps kullanın ve iğne elektrodunu sıkıca tutmak için bir elinizi kullanarak, elektrotu yerine sabitlemek için elektrotu deri altından arka bacağa yerleştirmek için diğer elinizi kullanın.

Referans gümüş/gümüş klorür elektrodunu, ortalanmış pelet arka yanak boyunca dayanacak ve dişlerin arkasında yerinde tutulacak şekilde hayvanın ağzına yerleştirin.

Kılcal elektrotları göze yerleştirmeden önce, elektrot tutucuyu cam kılcal damarlar dikey olarak yönlendirilecek şekilde konumlandırın ve sokulmuş olabilecek kabarcıkları çıkarmak için elektrot tutucuyu işaret parmağınızla hafifçe vurun.

Kılcal uçları HBSS ile doldurmak için 25 gauge bir iğne kullanın ve uçlarda sıkışmış hava kabarcığı olmadığından emin olmak için kılcal damarları inceleyin. Elektrot tutucu standını, HBSS dolgulu kılcal damarların açık uçları kornea ile nazikçe temas edecek şekilde konumlandırın ve kabarcıkların girmemesine dikkat ederek, ilk damlaları atmak için kayganlaştırıcı göz jeli dağıtıcısını ters çevirin. Ardından, iletkenliği korumak ve kayıt sırasında kurumayı önlemek için her göze bir damla kayganlaştırıcı göz jeli sürün.