JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:53 dk. • July 8th, 2025
Canlı bir Drosophila sineğini, başı açıkta, antenleri yapışkan bantla yapıştırılmış ve bir tutma çubuğuyla sabitlenmiş bir tüpe monte edin.
Kurumayı önlemek için hazırlığı sabit bir nemlendirilmiş hava akışı altında tutun.
Dolaşım sistemine ulaşmak için referans elektrodu, ağız kısımlarını koruyan destekleyici bir yapı olan clypeus'tan geçirin.
Kayıt elektrodunu böceğin duyu organı olan sensillum'un yakınına yerleştirin.
Elektrodu sensillumun tabanına yerleştirin.
Koku alma reseptörü nöronlarının yakınında doğru elektrot konumlandırmasını doğrulamak için sinyalleri belirli sivri uçlarla kaydedin.
Test kokusunu içeren bir kartuşu dağıtım tüpüne bağlayın.
Tüpü sineğin antenine nişan alarak konumlandırın, elektrotlardan yüksekliğini ve mesafesini ayarlayın.
Yazılımı kullanarak koku akış hızını ve dozaj miktarını ayarlayın, ardından koku maddesini serbest bırakın.
Şimdi, sineğin koku maddesine verdiği nöronal tepkiyi yakalamak için elektrik sinyallerini kaydedin.
Kayıt almak için, hızlı ve yumuşak bir hareketle referans elektrodu clypeus'a yerleştirin. Hemolenf ile temas edeceği kütikülün hemen altına yerleştirin. Ardından, kayıt elektrodunu hedef sensillum ile aynı görüş düzlemine girene kadar yavaşça indirin. Ardından, kayıt elektrodunu hassas tabana yerleştirin.
Devam etmeden önce, at4A ve at4C nöronlarından tanımlanabilir ani artışlarla yüksek bir sinyal-gürültü oranı olduğundan emin olun. at4A nöronu 20 hertz'den daha hızlı ateşlenmemelidir.
Şimdi, kartuşu koku verici dağıtım tüpüne bağlayın. Bu durumda, bir palmitoleik asit kartuşu takılır. Ardından, kartuşu kafaya doğrultarak hazırlığa doğru manevra yapmak için mikromanipülatörü kullanın. Kartuş ucunu yaklaşık 4 milimetre mesafeden doğrudan antene bakacak şekilde konumlandırın. Kartuş ayrıca sürgünün yaklaşık 1 milimetre üzerinde olmalıdır.
Kartuş, elektrotlar ve sürgü ile yakından sınırlanmış olabilir. İdeal olarak her iki elektrottan da en az dört milimetre uzakta olmalıdır. Stimülasyon için, koku akış kontrol cihazını 500 milisaniyelik patlamalara ayarlayın ve dakikada 500 mililitrelik bir akış hızı kullanın. Her uyaran patlaması için, elektriksel aktiviteyi 10 saniye boyunca kaydedin.