Bir Fare Beyin Kaması Diliminde İşitsel Sinir Kökü Stimülasyonu ve postsinaptik akım kayıtları

Transgenik bir fare beyin kama dilimini oksijenli aCSF ile perfüze edilmiş bir kayıt odasına sabitleyin.

Daha kalın kama tarafı, T-yıldız ve küresel gür hücreler dahil olmak üzere işitme siniri kökü ve koklear çekirdeği içerir.

Daha ince taraf, floresan medial olivokoklear nöronlara sahip yamuk gövdesinin medial ve ventral çekirdeğini içerir.

İşitme siniri kökünü mikroskobik olarak bulun ve üzerine uyarıcı bir elektrot yerleştirin.

Bir floresan medial olivokoklear nöronu tanımlayın ve ona doğru bir kayıt pipeti ilerletin.

Tüm hücre konfigürasyonu elde etmek ve elektriksel aktivitesini kaydetmek için nöronu yamalayın.

İşitsel sinir köküne elektrik darbeleri uygulayarak koklear çekirdek hücrelerini aktive edin.

Aktive edilmiş T-stellat hücreleri, medial olivokoklear nöronlara uyarıcı nörotransmiterler salgılar.

Bununla birlikte, küresel çalı hücreler, medial olivokoklear nöronlara inhibitör nörotransmiterleri serbest bırakarak inhibitör yolları aktive eder.

Uyarıcı ve inhibitör sinyallerin entegrasyonu, dilim içindeki nöronal aktiviteyi doğrulayan postsinaptik akımlarla sonuçlanır.

Elektrofizyoloji analizi için kama dilimini ayarlamak için, numuneyi 35 santigrat derece aCSF ile sürekli olarak perfüze edilen bir kayıt odasına yerleştirin ve dilimi stabilize edin. DIC optiklerini kullanarak, dilimin kalın tarafındaki işitsel sinir köküne odaklanın ve bipolar tungsten uyarıcı elektrodu işitsel sinir köküne ve nazikçe doku yüzeyine hareket ettirmek için bir mikromanipülatör kullanın.

Görüş alanını ince taraftaki yamuk gövdesinin ventral çekirdeğine taşıyın ve 561 nanometrelik bir emisyon filtresi kullanarak epifloresan altında yama kelepçesi elektrofizyolojisi için hedef olarak bir medial olivokoklear nöron seçin. Bir kayıt pipetini önerilen deney için uygun dahili çözelti ile doldurun ve DIC optiği altında, tüm hücre konfigürasyonundaki medial olivokoklear nörondan yama yapın ve kaydedin.

Medial olivokoklear nöronda tutarlı postsinaptik olaylar elde etmek için işitsel sinir kökünün elektriksel stimülasyon genliğini ayarlayın. Ardından, medial olivoklear nöronlarda uyarılmış sinaptik akımları gözlemlemek için uygun stimülasyon protokollerini çalıştırın.