Bir Sıçan Hipokampal Diliminde CA3-CA1 Sinaptik Yanıtlarının Kaydedilmesi

Bir elektrofizyoloji kurulumuna bir sıçan hipokampal dilimi yerleştirin.

Uyarıcı elektrotları, CA3 nöronlarından aksonal çıkıntılar alan hipokampal CA1 bölgesinin stratum radiatum tabakasına yerleştirin.

CA1 apikal dendritlerinin yanına bir kayıt elektrodu yerleştirin.

Stratum piramidal katmanına başka bir kayıt elektrodu yerleştirin.

Stimülasyon üzerine, CA3 aksonal projeksiyonları depolarize olur ve aksiyon potansiyelleri üreterek uyarıcı nörotransmiterleri serbest bırakır.

Bu nörotransmiterler, postsinaptik CA1 apikal dendritlerine bağlanarak, uyarıcı postsinaptik potansiyel veya EPSP olarak adlandırılan pozitif bir iyon akışı ve membran depolarizasyonunu indükler.

Kayıt elektrodu, apikal dendritlerden (EPSP veya fEPSP alanı) toplanan EPSP'leri ölçer. Kararlı fEPSP sinyalleri elde edildiğinde, elektrotları indirin ve kısa bir süre duraklayın.

fEPSP eğimi ile giriş-çıkış ilişkisini belirlemek için bir dizi stimülasyon yoğunluğu uygulayın, ardından eğime göre belirli bir yoğunluk seçin ve uygulayın.

İkinci kayıt elektrodu, CA1 nöronal hücre gövdelerinden gelen birleşik aksiyon potansiyellerini ölçer ve popülasyon artışları oluşturur.

Sinaptik etiketleme ve yakalama deneylerinde, mikroskop altında, Schaffer kollateral liflerini uyarmak için iki uyarıcı elektrotu CA1 bölgesinin stratum radiatumuna ve fEPSP yanıtlarını kaydetmek için uyarıcı elektrotların ortasında CA1'in apikal dendritik bölgesine bir kayıt elektrotu yerleştirin.

Popülasyon artışını kaydetmek için stratum pyramidale katmanına başka bir kayıt elektrodu yerleştirin. Tüm elektrotlar dilime dokunduğunda, her iki girişte de uygun bir alan EPSP sinyalinin elde edilebilmesini sağlamak için bir test stimülasyonu sağlayın.

Uygun bir fEPSP sinyali elde edildikten sonra, manipülatörlerin ince hareket düğmelerini kullanarak elektrotları dikkatlice yaklaşık 200 mikron daha indirin, ardından dilimin iyileşmesi için 20 dakika bekleyin. Bundan sonra, 20 mikroamperden 100 mikroampere kadar bir dizi akım yoğunluğunda EPSP alanının eğimini ölçerek giriş/çıkış ilişkisini belirleyin.

Ardından, her giriş için, maksimum alan EPSP eğiminin %40'ını uyandıran stimülasyon yoğunluğunu deney boyunca sabit uyaranlar olarak ayarlayın. 15 ila 20 dakika sonra taban çizgisini kaydetmeye başlayın.

LTP / LTD indüksiyonundan önce en az 30 ila 60 dakikalık kararlı bir taban çizgisi kaydedin.