Drosophila Larva Sinir Hücrelerinde Mikroelektrot Aracılı FM Boya Yükleme ve Boşaltma

Drosophila larvaları ile başlayın, açıkta kalan kas ve sinir lifleri, floresan membran boyası veya FM boyası vezikülleri içeren bir çözeltiye batırılır.

FM boyası, hücre zarındaki lipitlere bağlanarak üzerinde floresan bir kaplama oluşturur.

Bir mikromanipülatör ünitesi kullanarak, emme mikroelektrot ucunu mikroskop altında konumlandırın.

Sinir liflerine ve mikroelektroda odaklanın.

Sinir lifinin bir halkasını mikroelektroda emmek için negatif basınç kullanın.

Sinir lifini uyarmak için akım darbeleri uygulayın.

Bu, sinaptik vezikül endositozunu başlatmak için bir motor nöronun bir kas lifine bağlandığı nöromüsküler kavşağı tetikler.

Bu işlem sırasında hücre, nörotransmisyonun presinaptik aşamalarını görselleştirmek için ideal olan lekeli endositik veziküller oluşturmak için FM boya kaplı zarı yutar.

FM boyasını yıkayın ve harici solüsyonu değiştirin.

FM boya lekeli vezikülleri hücreden boşaltmak için akım darbeleri uygulayın.

Elektriksel stimülasyon için, gerekli konik ve uç boyutunu elde etmek için mikroelektrot çektirmesini kullanarak bir emme pipeti hazırlayın. Daha sonra, tek bir motor sinirini emerken sıkı bir uyum sağlamak için mikroelektrot ucunu bir mikro dövme ile ateşle p