In vivo (İn canlı) Drosophila melanogaster'de Sinaptik Lokalize Kalsiyum Sensörleri Kullanılarak Kalsiyum Görüntüleme

Beyni açıkta olan bir sineği bir görüntüleme odasında düzeltin.

Sinek, genetik olarak kodlanmış bir kalsiyum göstergesini veya mantar gövdesinin dendritlerinde veya MB nöronlarında lokalize GECI'yi ifade eder.

Sineği elektrik kablolarıyla bağlayın ve anteninin yanına bir koku verme iğnesi yerleştirin.

Açıkta kalan beyne bir tampon damlası ekleyin, sineği mikroskop altında konumlandırın ve iğneyi bir koku dağıtım sistemine bağlayın.

GECI'yi uyarın ve bir koku uyarısı verin.

Koku verici, antenin duyusal nöron reseptörlerine bağlanarak aksiyon potansiyelleri oluşturur.

Aksiyon potansiyelleri, duyusal nöronlardan projeksiyon nöronlarına yayılır, nörotransmitter salınımını indükler ve postsinaptik MB nöronlarında kalsiyum akışını ve GECI floresansını kolaylaştırır.

İkinci ve üçüncü bir koku verici ile tekrarlayın.

Daha sonra, ilk kokuyu elektrik çarpması ile ve ikincisi olmadan uygulayın.

Son olarak, üç kokuyu şok olmadan verin. Floresanı kaydedin.

Kontrollere kıyasla şokla ilişkili uyarana yanıt olarak azaltılmış bir floresan, öğrenmeye bağlı sinaptik plastisiteyi ortaya çıkarır.

GFP tabanlı kalsiyum göstergelerinin görselleştirilmesi için, kızılötesi lazerle donatılmış bir multifoton