JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:50 dk. • July 8th, 2025
Bir kayıt odasına iç kulak duyusal nöron hücre gövdelerinin bir kültürünü yerleştirin.
Yama kelepçeli bir pipeti dahili bir solüsyonla önden doldurun.
Membran delici bir antibiyotik içeren aynı çözelti ile doldurun ve yavaş yavaş uca ulaşmasını sağlayın.
Pipetin üçte ikisini antibiyotik solüsyonu ile doldurun, kayıt elektrodu içeren bir tutucuya yerleştirin ve hazneye indirin.
Bir nörona yaklaşmak için mikroskop altında görselleştirin.
Pipet ucu nörona temas ettiğinde nöronal yüzey bir çukur oluşturur ve direnç artar.
Pipet ile membran arasında sıkı bir sızdırmazlık oluşturmak için negatif basınç uygulayın.
Tutma potansiyelini dinlenme membran potansiyeline yakın tutun.
Antibiyotik, zarı deler ve kararlı bir iyonik ortam oluşturmak için hücre ve elektrot arasındaki iyon hareketine izin verir.
Voltaj kapılı iyon kanallarını açmak için voltaj adımları uygulayın, iyon akışına izin verin ve elektrot tarafından kaydedilen iyon kanalı işleviyle orantılı akımlar üretin.
Pipetin ucunu, amfoterisin içermeyen temiz bir çözelti ile doldurmak için kültür kabının temiz çözeltisine batırın. Pipetin arkasını amfoterisin içeren iç solüsyonla doldurun. Amfoterisin pipetin arkasından uca yavaşça girerken, pipetin ucunu tekrar kültür kabının temiz çözeltisine batırın. Ardından, pipeti pipetin 2 / 3'üne kadar amfoterisin solüsyonu ile doldurmayı bitirin.
Pipeti kayıt odasının banyosuna indirin ve pipet ucunu görüş alanının ortasına yerleştirin. Ucunda hava kabarcıkları veya diğer kalıntılar olmadığından emin olun. Pipeti zarın yakınına yerleştirin ve hücrenin ortasına sıkıca inin. Bir şırınga veya ağız pipeti kullanarak negatif basınç veya emme uygulayın.
Eksi 60 milivoltluk tutma potansiyelini açın. Sızdırmazlık direnci, bir gigaohm'u geçene kadar artmalıdır. Bir gigaohm conta oluştuğunda, negatif basıncı serbest bırakın. Amfoterisin çalışmaya başlar. Giriş direnci yavaş yavaş azalır ve 5 milivolt voltaj adımına yanıt olarak akan akım, amfoterisin zara girdikçe kademeli olarak artar.