Toksinlerin Civciv Embriyo Sinir Ağı Gelişimi Üzerine Etkilerinin Çok Elektrotlu Diziler Kullanılarak Değerlendirilmesi

Hücre dışı matris kaplı çoklu elektrot dizileri veya MEA'lar üzerinde erken embriyonik civciv nöronlarının yapışık kültürleriyle başlayın.

MEA'ların tabanı, nöronal aktiviteyi kaydeden küçük elektrotlardan oluşan ızgaralar içerir.

Test kültüründe, nöronlar bir toksin varlığında büyürken, kontrol kültüründe nöronlar toksin olmadan büyür.

Kayıttan önce, her iki MEA'daki ortamı toksin içermeyen ortamla değiştirin ve kısa bir süre inkübe edin.

Ardından, kayıt cihazına bir MEA yerleştirin ve kayda başlayın.

Nöronlar, aksiyon potansiyelleri veya sivri uçlar adı verilen elektriksel uyarılar yoluyla iletişim kurar.

Sinapsta, bu aksiyon potansiyelleri nörotransmitter salınımını tetikler ve sinyali bir sonraki nörona yayar.

MEA elektrotları, sinaptik olarak bağlı nöronlar tarafından üretilen sivri uçları kaydeder.

Kontrol durumunda, sağlıklı olgun nöronal ağ, senkron spiking aktivitesi sergiler.

Test kültüründe, azalmış spiking ve senkronizasyon, toksinin neden olduğu bozulmuş nöronal ağ olgunlaşmasını gösterir.

Edinme gününde, kültür ortamını taze nörobazal ortamla değiştirin ve dizileri kayıttan önce en az iki saat boyunca CO₂ inkübatörüne geri koyun. Kayıt yazılımını başlatın ve sıcaklık simgesine tıklayarak çoklu elektrot dizisinin sıcaklığını 37 santigrat dereceye ayarlayın. Sol pencere panelinde akışları seçerek ve muse simgesini sağ tıklatarak alım parametrelerini ayarlayın. Ardından, İşleme Ekle ve Ani Yükselme Algılayıcısı'nı seçin ve açılır pencerede Tamam'a tıklayın. Spike Detector 6 by STD, dosya adının altında görünecektir.

Ardından, Spike Detector'a sağ tıklayın, İşleme ve Burst Detector Ekle'yi seçin ve açılır pencerede Tamam'a tıklayın. Burst Detector ISI, ilham perisi simgesinin altında görünecektir. Ardından Burst Detector'a sağ tıklayın, Add Processing ve Neural Statistics Compiler'ı seçin. Açılan pencerede, Dosya Başlığı, Toplu Kuyu İstatistikleri ve Senkronizasyon'un seçili olduğundan emin olun. Tamam'a tıklayın.

İstatistik Derleyicisi aşağıda görünecektir. Ekranın alt kısmındaki saat simgesine tıklayın ve Ayarlar bölümündeki bilgileri her 5.1 dakikada bir kayıt yapacak ve beş dakika boyunca kayıt yapacak şekilde değiştirin. Bu hemen başlatılacak ve bir kez yürütülecektir. Çoklu elektrot dizisini inkübatörden aldıktan sonra, kayıt ünitesine yerleştirin ve yerine kilitleyin. Planlanan kayıt bölümünde Kaydı Başlat'a tıklayarak ağ etkinliğini kaydetmeye başlayın.