Glial Hücrelerin Tek Hücreli Görüntülenmesi için Drosophila Beyinlerinin İmmünofloresan Boyaması

Hücreye özgü bir rekombinaz sistemi barındıran farklı glial hücre tipleri içeren transgenik Drosophila sineklerinden elde edilen beyinlerle başlayın.

Aynı tip hücreler üzerinde farklı antijenik epitoplara kaynaşmış bir hücre yüzeyi proteininin ekspresyonunu yönlendirir.

Proteinleri çapraz bağlamak ve doku mimarisini korumak için dokuyu bir fiksatif ile tedavi edin.

Fazla fiksatifi çıkarmak için yıkayın.

Arka plan lekelenmesini azaltmak için spesifik olmayan bağlanma bölgelerini maskelemek için bloke edici proteinler ekleyin.

Dokuyu, glial hücreler üzerinde eksprese edilen farklı epitoplara bağlanan bir birincil antikor kokteyli ile inkübe edin.

Bağlanmamış primer antikorları çıkarmak için yıkayın.

Primer antikorlara bağlanan florofor konjuge sekonje sekonder antikorlarla inkübe edin.

Bağlanmamış ikincil antikorları çıkarmak için yıkayın.

Beyni bir görüntüleme ara parçasının içine monte edin ve bir lamel yerleştirin. Ara parça, üç boyutlu yapısını koruyarak doku için bir oda oluşturur.

Farklı florofor-konjuge antikorlarla etiketlenmiş aynı glial tipteki farklı hücreler, hücre-hücre etkileşimlerinin anlaşılmasını sağlar.

İzole edilmiş beyinleri bir P10 pipet ucu kullanarak fiksatif s