Fare Hipokampal Nöronlarında Sinaptik Vezikül Endositozunun Transmisyon Elektron Mikroskobik Görüntülenmesi

Fare hipokampal nöronlarını yaban turpu peroksidaz veya HRP içeren yüksek potasyumlu bir tamponla tedavi ederek başlayın.

Yüksek potasyum, presinaptik nöronları depolarize ederek sinaptik vezikül ekzositozunu tetikler. Nöronlar daha sonra HRP'yi yeni oluşan veziküllere dahil ederek endositoz yoluyla sinaptik vezikül zarlarını alır. Nöronları glutaraldehit ile sabitleyin ve fazla glutaraldehiti çıkarmak için yıkayın.

Hidrojen peroksit ve elektron yoğun çökeltiler oluşturmak üzere HRP tarafından oksitlenen kromojenik bir substrat ekleyin. Reaksiyona girmemiş alt tabakayı çıkarmak için yıkayın.

Membran kontrastını artırmak için osmiyum tetroksit ile muamele edin, ardından fazla reaktifi yıkayın. Ardından, organel kontrastını artırmak için uranil asetat ekleyin.

Artan etanol konsantrasyonları kullanarak nöronları kurutun ve reçineye gömün.

Hücre yoğun bölgeleri mikroskobik olarak tanımlayın ve bunları çıkarın. Ardından ultra ince bölümler hazırlayın.

Bir bölümü bakır bir ızgaraya aktarın ve kontrast maddelerle boyayın.

Transmisyon elektron mikroskobu kullanıldığında, HRP içeren veziküller elektron yoğun yapılar olarak görünür.

90 saniye boyunca oda sıcaklığında her bir oyuğa 1.5 mililitre yük