JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 1:48 dk • April 28th, 2025
Nöronal progenitör hücreler, astrositler ve nöronlar dahil olmak üzere sabit ve geçirgen periferik kandan türetilmiş nöral hücreler içeren protein kaplı lameller içeren çok odacıklı bir slayt alın.
Belirli olmayan bağlama sitelerini engellemek için bir engelleme çözümü ekleyin.
Belirli hücresel proteinlere bağlanan floresan boya konjuge antikorlarla inkübe ederek nöral hücre tiplerinin tanımlanmasını sağlar.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için tamponla yıkayın.
Çekirdeği boyamak için floresan nükleer boya ile inkübe edin.
Lameli montaj ortamıyla bir kızağa aktarın. Daha sonra hazırlanan slaytı uygun filtrelerle donatılmış bir floresan mikroskobu altına yerleştirin.
Belirli dalga boylarında ışık kullanarak, floresan boyaları uyararak daha uzun dalga boylarında ışık yaymalarına neden olun.
Yayılan floresan sinyaller, etiketli hücresel proteinlere karşılık gelir, farklı nöral hücre tiplerini belirgin bir şekilde vurgular ve yeniden programlanmış kan hücrelerinin farklılaşmasını doğrular.
PBS ve %5 BSA'dan oluşan bir engelleme çözümü ekleyin. Hücreleri oda sıcaklığında bir külbütör plaka üzerinde bir saat boyunca bloke edin. % 1 BSA PBS'de uygun bir antikor seyreltmesi hazırlayın ve hücreleri antikorlarla birlikte oda sıcaklığında 1.5 saat boyunca bir külbütör plakası üzerinde inkübe edin. Hücreleri yıkama başına beş dakika boyunca PBS ile üç kez yıkayın. Hücreleri DAPI ile inkübe edin ve mikroskopta görselleştirmek için lamellerin montaj ortamı ile monte
edilmesi.