JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:38 dk. • April 28th, 2025
Çok kuyucuklu bir plakada poli-D-lizin kaplı lameller üzerinde kültürlenmiş vahşi tip ve CCR5 nakavt fare birincil hipotalamik nöronları ile başlayın.
Bu nöronlar, sitoplazmada yeşil floresan protein etiketli glikoz taşıyıcı-4'ü (GFP-GLUT4) eksprese eder.
Lamelleri cam slaytlara aktarın ve görüntü alımı sırasında stabiliteyi sağlamak için fazla ortamı nazikçe silin.
Evrişim mikroskobu aşamasına, lamel aşağı bakacak şekilde bir slayt yerleştirin.
Nöronları parlak alan aydınlatması altında görselleştirin, ardından sırayla kemokin CCL5 ve insülin ile tedavi edin.
GFP-GLUT4 eksprese eden hedef nöronları tanımlamak için floresan aydınlatmaya geçin ve canlı floresan görüntüler yakalamak için görüntüleme parametrelerini ayarlayın.
vahşi tip nöronlarda, insülin ve CCL5 sırasıyla insülin reseptörüne ve CCR5'e bağlanır ve GFP-GLUT4 membran translokasyonunu çalıştıran aşağı akış sinyal yollarını aktive eder.
CCR5-nakavt nöronlarında, CCL5 bağlanamaz ve GFP-GLUT4 translokasyonunun azalmasına neden olur.
Görüntüleri yakalayın ve odak dışı ışığı azaltmak, görüntü netliğini ve çözünürlüğünü artırmak için bir evrişim giderme algoritması uygulayın.
Hücreleri canlı görüntülemeye hazırlamak için, forseps ku
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin