Dekonvolüsyon Mikroskobu Kullanılarak Fare Primer Hipotalamik Nöronlarında GLUT4 Protein Kaçakçılığının Görüntülenmesi

0 görüntüleme3:38 dk • April 28th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çok kuyucuklu bir plakada poli-D-lizin kaplı lameller üzerinde kültürlenmiş vahşi tip ve CCR5 nakavt fare birincil hipotalamik nöronları ile başlayın.

Bu nöronlar, sitoplazmada yeşil floresan protein etiketli glikoz taşıyıcı-4'ü (GFP-GLUT4) eksprese eder.

Lamelleri cam slaytlara aktarın ve görüntü alımı sırasında stabiliteyi sağlamak için fazla ortamı nazikçe silin.

Evrişim mikroskobu aşamasına, lamel aşağı bakacak şekilde bir slayt yerleştirin.

Nöronları parlak alan aydınlatması altında görselleştirin, ardından sırayla kemokin CCL5 ve insülin ile tedavi edin.

GFP-GLUT4 eksprese eden hedef nöronları tanımlamak için floresan aydınlatmaya geçin ve canlı floresan görüntüler yakalamak için görüntüleme parametrelerini ayarlayın.

vahşi tip nöronlarda, insülin ve CCL5 sırasıyla insülin reseptörüne ve CCR5'e bağlanır ve GFP-GLUT4 membran translokasyonunu çalıştıran aşağı akış sinyal yollarını aktive eder.

CCR5-nakavt nöronlarında, CCL5 bağlanamaz ve GFP-GLUT4 translokasyonunun azalmasına neden olur.

Görüntüleri yakalayın ve odak dışı ışığı azaltmak, görüntü netliğini ve çözünürlüğünü artırmak için bir evrişim giderme algoritması uygulayın.

Hücreleri canlı görüntülemeye hazırlamak için, forseps kullanarak nöronlu lamelleri dikkatlice çıkarın ve dikkatli bir şekilde cam slayta yerleştirin. Ardından, hassas görev mendilleriyle fazla ortamı iki kez katlayarak ve hareket ettirmeden lamel üzerine dikkatlice yerleştirerek çıkarın.

Lamel üzerinde gereksiz hareketi önlemek için fazla miktarda ortamın çıkarılması önemlidir.

Daha sonra, seçilen hücre örneklerini bir dakika boyunca mililitre başına 10 nanogram CCL5 veya mililitre başına 10 birim insülin ile muamele edin. Bunu takiben, lamellerin kenarına 1,5 mikrolitre seyreltilmiş insülin ekleyin. Ardından, 60 kat büyütmeli 1.52 NA objektif lens üzerine daldırma yağı ekleyin.

Daha sonra, lamelleri, lameller aşağı bakacak ve düzgün bir şekilde sabitlenecek şekilde evrişim mikroskobu aşamasına yerleştirin. Hedef hücreleri tanımlamak için parlak alan veya floresan aydınlatması kullanın. Daha sonra, hedef hücreler net bir şekilde gözlemlenene kadar odağı ayarlayın. Gereksiz çizik izlerini önlemek için objektif merceği lamel alanının dışına çıkarmayın.

Ardından, GFP-GLUT4'ü GFP sinyali ile tanımlayın. Ardından, görüntü elde etmek için istenen hedef hücreleri belirleyin. Ardından, piksel sayısı, uyarma dalga boyu, iletim yüzdesi, maruz kalma süresi, yığın kalınlığı, zaman aralığı ve toplam görüntüleme süresi dahil olmak üzere her hedef hücrede uygun deneysel parametreleri ayarlayın. Maksimum piksel yoğunluğunu elde etmek için pozlama parametresini yaklaşık 2.000 ila 3.000 sayıma ayarlayın.

Floresan foto ağartmayı en aza indirmek için, pozlama süresini 1 saniyeden az tutarken, uyarma ışığı iletim yüzdesini mümkün olduğunca azaltın. Mikroskop aşamasını hedef hücrenin üst ve alt kısımları hafifçe odak dışına çıkana kadar hareket ettirerek her hedef hücredeki z yığınının üst ve alt sınırını ayarlayın.

08:32

Hipotalamik insülin sinyal fare beyin içine sürekli uyuşturucu infüzyon sistemi ile periferik glikoz intoleransı için eğitim

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:07

TDP-43 Proteinopatisinin Drosophila Modellerinde Glikoz Alımının Ölçülmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:58

Görüntüleme İlköğretim Kültürlü Fare Nöronlar içinde Plazma Membran Reseptör Yerleştirme pHluorin etiketli

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:27

Hipokampal Nöronlarda Glutamat Reseptör Kaçakçılığını İncelemek İçin İn Vitro Bir Teknik

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:10

Bir fare beyin diliminde tek bir nöron sinapsında glutamat salınımının ve klerensinin analiz edilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:10

Membran Yetişkin farelerin ventromedial Hipotalamus Nöronlar Potansiyel Boya Görüntüleme Glikoz Algılama Çalışması için

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:47

GLUT4 protein Deconvolution mikroskobu kullanarak fare birincil hipotalamik nöronlarda ticareti canlı görüntüleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:13

Disanated primer hipokampal kültürlerde glutamat reseptör kaçakçılığı çalışması için antikor beslenme yaklaşımı

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:27

Normal ve Huntington Farelerden Akut Beyin Dilimlerinde Glutamat Salınımı ve Alımının Tek Sinaps Göstergeleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:03

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026