Organotipik Beyin Dilimi Kültürlerinde Oligodendrositler İçindeki Mitokondriyal Hareketin Konfokal Görüntülenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:11 dk. • April 28th, 2025
Dolaşımdaki bir görüntüleme solüsyonu ve kontrollü sıcaklık ile konfokal bir mikroskop banyo odası kurulumuyla başlayın.
Mitokondriye özgü bir kırmızı floresan proteini ve sitozole özgü bir yeşil floresan proteini ifade etmek için oligodendrositlerin dönüştürüldüğü organotipik bir fare beyni dilimi içeren hidrofilik bir polimerik zar alın.
Çift floresan, oligodendrositin sitozolündeki mitokondriyal dinamiklerin net bir şekilde görselleştirilmesini sağlar.
Dilimi banyonun ortasına batırın ve bir arp ankrajıyla sabitleyin.
Hedefi düşürün ve tarama için sağlıklı bir oligodendrosit seçin.
Hücre toksisitesini ve foto ağartmayı en aza indirmek için lazer gücünü ayarlayın.
Mikroskop parametrelerini ayarlayın ve ardından floresan etiketli mitokondrinin hızlandırılmış görüntülerini kaydedin.
Tüm hücrenin yüksek çözünürlüklü, üç boyutlu bir görünümünü elde etmek için farklı derinliklerde z yığını görüntüleri yakalayın.
Oligodendrosit içindeki mitokondriyal hareketi görselleştirmek için görüntüleri işleyin.
Konfetileri dilimle birlikte Petri kabından banyonun tepesine aktarmak için forseps kullanın. Daha sonra forsettin iki ucunu konfetinin her iki tarafına, dilime dokunmadan konfetiye değecek şekil
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin