Golgi-Cox Metalik Boyama Kullanılarak Bir Fare Beyin Bölümündeki Nöronların Mikroskobik Görüntülenmesi

Nöronları seçici olarak koyulaştırmak için Golgi-Cox solüsyonu ile boyanmış ve beyin bölgesini vurgulamak için kresil menekşe ile karşı boyanmış kalın bir beyin bölümüyle başlayın.

Onları, doku şeffaflığını artırmak için bir temizleme maddesi ile ön işleme tabi tutulmuş bir slayta yerleştirin.

Slaytı mikroskop tablasına yerleştirin, silikon yağı uygulayın ve objektif merceği yağla temas edene kadar indirin.

Silikon yağı, objektif lensin ve lamın kırılma indisiyle eşleşerek ayrıntılı görüntülemeyi mümkün kılar.

Örneğe odaklanın, ardından en iyi görüntü kalitesi için kameranın pozlamasını ve beyaz dengesini ayarlayın.

Üst sınırı ayarlamak için üst katmana, ardından alt sınırı ayarlamak için alt katmana odaklanın.

Nöronal projeksiyonların ayrıntılarını yakalamak için yeterli örtüşme ile görüntüler arasındaki boşluğu ayarlayın.

İlgi alanlarını yakalamak için görüntülemeyi farklı konumlarda tekrarlayın, ardından nöronların üç boyutlu bir temsilini oluşturmak için bu görüntüleri üst üste bindirin.

İlgilenilen nöronu içeren alanın yüksek çözünürlüklü görüntü yığınlarını yakalamak için, önce mikroskopta 30x 1.05 NA silikon yağına daldırma objektifi seçin. Ardından, slayta 3 ila 4 damla sili