Fare Retinasının İki Fotonlu İn Vivo Görüntülemesi

Fare retinasının in vivo görüntülemesi için başı bir tutucu üzerinde açılı olarak sabitlenmiş anestezi uygulanmış transgenik bir fare alın.

Retina, florofor etiketli bir proteini ifade eden retinal ganglion hücreleri veya RGC'ler içerir.

Göz kayganlaştırıcı uygulayın ve gözün üzerine bir lamel takın.

Mikroskop altında, RGC'lerdeki floresan proteinleri uyarmak için retinayı eşit şekilde aydınlatın.

Yayılan floresansı kullanarak, odak düzlemi RGC'lerinin ve odak dışı RGC'lerin geniş alan görünümünü elde edin.

Düşük enerjili yakın kızılötesi ışığı RGC katmanına odaklayarak iki fotonlu görüntüleme moduna geçin.

Odak noktasında, iki fotondan gelen birleşik enerji floroforu uyarır, bu da enerjiyi floresan olarak serbest bırakır.

Uyarılma tek bir noktayla sınırlı olduğundan, diğer odak düzlemlerinden gelen floresan en aza indirilir.

RGC katmanının tamamını görüntülemek için z ekseni boyunca birden çok odak düzleminde görüntüler yakalayın.

Farenin her iki gözüne de kayganlaştırıcı göz damlası uygulayın. Kafa tutucunun ana kolunu, bir gözün göz bebeği ışık yolu ile aynı hizaya gelene kadar döndürün ve kompakt filtre tutucusuna 1.5 numaralı bir lamel yerleştirin. Tutucuyu mikroskop aşamasına sabit