JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 4:02 dk • May 29th, 2025
Yüksek çözünürlüklü derin yapı görüntüleme için şeffaflık için çıkarılan floresan proteinleri ve lipitleri ifade eden hücrelerle temizlenmiş bir fare beyni alın.
Bir hidrojel ağ, biyomolekülleri korur ve nöronal ağları korur.
Beyni, destek için bir agaroz halkası içeren bir görüntüleme odasına aktarın.
Dokuyu yapıştırıcı ile sabitleyin ve ışık saçılımını en aza indirmek ve stabil bir görüntüleme ortamı oluşturmak için hazneyi kırılma indisi eşleştirme solüsyonu ile doldurun.
Odayı konfokal bir mikroskop aşamasına yerleştirin ve sürekli bir temas sütunu oluşturmak için hedefi çözeltiye yavaşça indirin.
İlgilenilen bölgeleri bulmak için epifloresan kullanın. Ardından, görüntü kalitesini optimize etmek için lazer ve görüntüleme parametrelerini ayarlayın.
Dokunun üç boyutlu bir temsilini oluşturmak için bir dizi z yığını yakalayın.
Dendritik arbors, dikenleri ve nöronların dağılımı ve yoğunluğu dahil olmak üzere hücresel morfolojiyi analiz etmek için uygun yazılımı kullanın.
Kalınlığı 5 milimetreden fazla olan dokular için büyük bir doku görüntüleme odası oluşturmak için, yüksek duvarlı 10 santimetrelik bir cam tabak kullanın. Merkeze 50 mililitrelik konik bir tüp yerleştirin ve tüpün çapının kullanılan objektif merceğin namlusunu kabul edecek kadar büyük olduğundan emin olun. Suda% 3 agaroz yapın ve cam tabak ile konik tüp arasındaki boşluğa dökün.
Ardından bir saat soğumaya bırakın. Bu, katı bir agaroz halkası oluşturacaktır. Dokuyu süper yapıştırıcı kullanarak haznenin dibine güvenli bir şekilde yapıştırın ve hazneyi, havadan korunmadıkça ve 4 santigrat derecede saklanmadıkça polimerleşmeye başlayabilen kırılma indisi eşleştirme solüsyonu ile doldurun. Görüntüyü konfokal bir mikroskop kullanarak elde edin.
İlgili tüm görüntüleme ekipmanlarını açın. Numuneyi sahneye yerleştirin. Daldırma ortamına objektifle dikkatlice yaklaşın ve sürekli bir medya sütunu oluşturun. Epifloresan kullanarak uygun bir görüntüleme alanı bulun. Çözünürlük ve tarama hızı ayarlarını yaparak başlayın.
Konfokal mikroskop kullanarak görüntüleme yapıyorsanız, en küçük optik bölümü ve dolayısıyla en iyi Z çözünürlüğünü elde etmek için iğne deliğini tamamen kapatın. Yüksek sinyal-gürültü oranıyla uygun bir görüntü elde edilene kadar lazer gücünü veya sensör kazancını kademeli olarak artırın. Standart EGFP veya tdTomato iki renkli görüntüleme kullanıyorsanız, ışık toplama ayarlarını yapın.
Z yığını parametrelerini, dokunun gözlemlenen başlangıç ve uç noktalarına göre ayarlayın. İstenen Z çözünürlüğüne göre adım boyutunu ayarlayın. Daha küçük adım boyutları daha yüksek bir Z çözünürlüğü sağlar, ancak numune ağartmasına yol açabilir.
Görüntü alma ayarlarından memnun kaldığınızda, görüntüyü alın. Görüntünün yüksek bir sinyal-gürültü oranına sahip olduğundan ve yapıların farklı sınırlarını gösterdiğinden emin olun.
Bu makale, konfokal mikroskopi kullanılarak şeffaflaştırılmış fare beyinlerinin görüntülenmesi için bir yöntemi açıklamaktadır. Bu teknik, nöronal ağların ve hücresel morfolojinin yüksek çözünürlüklü görselleştirilmesine olanak tanır.
Berraklaştırılmış fare beyinlerinde sağlam dendritik ağaçların ve spinal morfolojinin yüksek çözünürlüklü konfokal görüntülemesi, erken dönem MSS ilaç keşfi için kritik olan nöronal mimarinin kantitatif analizine olanak tanır. Bu iş akışı, ayrıntılı, üç boyutlu hücresel bağlam sağlayarak mekanistik risk azaltma ve hedef doğrulamada öngörücü güveni destekler. Bu yaklaşım, moleküler bulguları karmaşık doku düzeyindeki fenotiplerle ilişkilendirerek translasyonel sürekliliği artırır.
Bu konfokal görüntüleme iş akışı, erken keşif aşamasından preklinik araştırmalara kadar olan süreci entegre ederek MSS portföylerindeki hipotez testlerini, hedef doğrulamayı ve translasyonel biyobelirteç uyumlandırmayı destekler.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 29 Ağustos 2026