Uyanık Bir Farede Mikroglial Dinamiklerin ve Nöronal Aktivitenin Eş Zamanlı Görüntülenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:13 dk. • May 29th, 2025
Görsel korteksinin üzerine yerleştirilmiş bir kraniyal pencere ile stereotaktik bir çerçeveye sabitlenmiş transgenik bir fare ile başlayın.
Fare, mikroglia'da EGFP'yi ve görsel korteksin nöronlarında kırmızı bir floresan kalsiyum göstergesi olan R-CaMP'yi ifade eder.
Fareyi iki fotonlu bir mikroskop altına yerleştirin ve objektif lensi beyin yüzeyine odaklanacak şekilde ayarlayın.
Fareyi stereotaktik çerçeve ile objektif mercekten hareket ettirin ve bir gölgeleme cihazı takın.
Gölgeleme cihazını suyla doldurun ve fareyi mikroskop altında yeniden konumlandırın.
Lensi siyah folyo ile kapatın.
Gölgeleme cihazı ve folyo, harici ışık girişimini engelleyerek doğru görüntüleme sağlar.
Görsel stimülasyon sağlamak için farenin gözünün önüne bir LCD monitör yerleştirin.
Görüntüleme parametrelerini ayarlayın ve görüntülemeye başlayın.
Görsel stimülasyon, nöronal uyarımı tetikleyerek kalsiyum akışına ve R-CaMP floresansında bir artışa yol açar.
Bu arada, mikroglia, canlı görüntüleme yoluyla gözlemlendiği gibi, aktive edilmiş nöronlarla etkileşime girerken süreçlerini geri çeker.
Özel yapım gölgeleme cihazını ve görsel stimülasyon için bir LCD monitörü takmak için önce lensi beyin yüzeyine odaklanaca
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin