JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 6:00 dk. • May 29th, 2025
Bromodeoksiuridin veya timidinin bir nükleosit analoğu olan BrdU enjekte edilen bir sıçandan hipokampal beyin dilimleri alın.
BrdU, hücre bölünmesi sırasında DNA'ya entegre olur ve nörojenez için bir bölge olan dentat girus içinde yeni üretilen nöronları etiketler.
Endojen peroksidaz enzimlerini inaktive etmek için oksitleyici bir ajan ile inkübe edin.
DNA'yı denatüre etmek ve BrdU'yu açığa çıkarmak için asitle muamele edin, ardından asidi nötralize edin.
Hücresel zarları geçirgen hale getirmek için bir deterjan ve spesifik olmayan bağlanma bölgelerini maskelemek için bir engelleme çözeltisi ile inkübe edin.
BrdU'yu hedefleyen primer antikorlarla inkübe edin, ardından primer antikorlara özgü peroksidaz etiketli ikincil antikorlar izleyin.
Peroksidazın substratı renkli bir kalıntıya dönüştürmesine izin veren bir kromojenik substrat ve bir oksitleyici ajan ekleyin.
Dokuyu monte edin ve nükleik asit bağlayıcı bir boya ile lekeleyin.
Dokuyu kurutun, ardından şeffaflığı artırmak için tedavi edin.
Mikroskop altında, dentat girusu tanımlayın.
Optik fraksiyonatör tekniğini kullanarak, BrdU etiketli nöronları ölçmek için doku kalınlığı boyunca birden fazla düzlemi analiz edin.
Başlamaya hazır olduğu
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin