JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:36 dk. • May 29th, 2025
Seyrek piramidal nöronlarda floresan proteinleri eksprese eden anestezi uygulanmış bir transgenik fareyi ele alalım.
Fare, dorsal hipokampus üzerine bir görüntüleme kanülü ile implante edilir.
Fareyi iki fotonlu mikroskobun altında bir ısıtma yastığı üzerine yerleştirin ve kafasını hareketsiz hale getirmek için kanülün kafa plakasını tutucuya sabitleyin.
Kornea kurumasını önlemek için merhem sürün.
Kanülü deiyonize suyla temizleyin ve kalıntı, hasar veya floresan sorunlarını kontrol etmek için düşük büyütmeli bir objektif altında inceleyin.
Hassas görüntüleme için görüntüleme kanülünü mikroskobun optik ekseni ile hizalayın.
Ardından, suya daldırma yüksek çözünürlüklü bir hedefe geçin.
Kanülü deiyonize suyla doldurun ve görüntünün bozulmasını önlemek için hava kabarcığı olmadığından emin olun.
Odak düzlemindeki floroforları seçici olarak uyarmak için kızılötesi ışık kullanarak iki fotonlu uzunlamasına görüntüleme gerçekleştirin ve derin doku görüntülemeyi mümkün kılın.
İmplante edilen kanül, zaman içindeki dendritik değişiklikleri izlemek için dorsal hipokampusa tekrar tekrar erişimi kolaylaştırır.
Fareyi mikroskop altında ısıtma halısının üzerine yerleştirin ve kafa plakasını tutucuya sabitleyin. Hayvanın gözlerine göz merhemi sürün. Daha sonra görüntüleme kanülünü bir şırınga ve ince bir iğne kullanarak deiyonize suyu kanüle damlatmak için temizleyin ve ardından bir vakum pompası ile çıkarın.
Kanülde artık su, kir, bütünlük ve floresan varlığı açısından görsel olarak kontrol etmek için düşük büyütmeli, uzun çalışma mesafeli objektifler kullanın. Ardından, baş tutucu kolların açılarını ayarlayarak kanülü optik eksene hizalayın.
1,0 sayısal diyafram açıklığına ve 4 milimetre çalışma mesafesine sahip 25x objektife geçin. Daha sonra kanüle doldurmak için yeterince deiyonize su ekleyin ve fazla suyu kanülün üzerinde tutun. Son olarak, iki foton uyarımı kullanın ve floresan sinyallerini görüntüleyin.