Sirkadiyen Saat Nöronlarının Hızlandırılmış Görüntülenmesi için Drosophila Beynini Bir Matrise Yerleştirme

Önceden aydınlık / karanlık döngüsüne maruz kalmış Drosophila larva beynini içeren bir Petri kabı kapağıyla başlayın. Dilim, floresan protein ifade eden saat nöronları içerir.

Nöronal sağkalımı desteklemek için antibiyotikli besin açısından zengin bir ortam ve sıcak bir fibrinojen çözeltisi ekleyin.

Fibrinojeni eşit şekilde dağıtmak için çözeltiyi yavaşça karıştırın.

Bu karışımdan küçük bir miktar cam tabanlı bir tabağın lamel üzerine yerleştirin.

Üç boyutlu bir fibrin matrisinin oluşumunu indüklemek için fibrinojen ile reaksiyona girmek için trombin ekleyin.

Beyni bu matrisin üzerine aktarın ve görüntüleme için saat nöronlarını hizalamak için ön tarafı aşağı gelecek şekilde konumlandırın.

Matrisi sabitlemek ve hareketi önlemek için beynin üzerine katlayın.

Trombin aktivitesini inaktive etmek için besin açısından zengin ortam ekleyin.

Hidrasyonu ve nöronal canlılığı korumak için çanağı gaz geçirgen bir zarla kapatın.

Belirli aralıklarla hızlandırılmış floresan görüntüleme gerçekleştirin.

Saat nöronlarındaki floresan değişiklikleri, sirkadiyen ritimleri, günlük aktivite döngüsünü yansıtan, aydınlık / karanlık döngüsü ile senkronize olan ritmik aktivasyonlarını ve inhibisyonlarını ort