JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:53 dk. • May 29th, 2025
Fare embriyolarından elde edilen ventral orta beyin nöronlarının kültürüne sahip bir lamel alın.
Hücreler, bir kalsiyum indikatörünü ifade etmek için viral bir vektör ile enfekte edilir.
Lameli bir kayıt tamponu ile perfüze edilmiş bir konfokal mikroskobun kayıt odasına aktarın.
Görünür ışığı kullanarak, birden fazla nöron içeren bir bölgeyi belirleyin, ardından floresan görüntülemeye geçin.
Düşük hücre içi kalsiyum seviyelerinde, gösterge bağlanmadan kalır ve düşük floresan yoğunluğu sergiler.
Nöronların içsel özellikleri, voltaj kapılı kalsiyum kanallarının açılmasını ve kalsiyum akışına izin vermesini tetikleyen spontan aksiyon potansiyelleri üretir.
Fazla kalsiyum, indikatöre bağlanarak floresan yoğunluğunu artıran konformasyonel bir değişikliğe neden olur.
Spontan kalsiyum aktivitesini izlemek için zaman içindeki floresan yoğunluğunu kaydedin.
Nöronlar üzerindeki reseptörlere bağlanan ve sürekli aksiyon potansiyelleri üreten yüksek konsantrasyonda bir nörotransmitter tanıtın.
Sürekli voltaj kapılı kalsiyum kanalı aktivasyonu, kalsiyum akışını uzatarak floresan yoğunluğunda sürekli bir artışa neden olur.
El yazması talimatlarına göre 1 litre HEPES kayıt tamponu, 200 mililitre 20 mikrom
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin