Kısa Süreli ve Uzun Süreli Sıçan Hipokampal Kültürlerinde İn Vitro Kalsiyum Görüntüleme

Genç nöronları temsil eden kısa süreli bir sıçan hipokampal nöronal kültürünü ve yaşlı nöronları temsil eden uzun süreli bir kültürü ele alalım.

Yaşlı nöronlar, membran depolarizasyonu üzerine daha uzun süre açık kalan L-tipi voltaj kapılı kalsiyum kanallarının veya L-VGCC'lerin daha yüksek bir yoğunluğunu sergiler.

Hücrelere yayılan bir floresan kalsiyum indikatörü ile inkübe edin, ardından fazla boyayı çıkarmak için yıkayın.

Kültürleri bir floresan mikroskobu altında bir perfüzyon odasına yerleştirin.

Nöronlar üzerindeki reseptörlere bağlanan, sodyum iyonlarının akışını indükleyen ve membran depolarizasyonunu tetikleyen nörotransmiterler içeren bir çözelti ekleyin.

Depolarizasyon, L-VGCC'leri aktive ederek sitoplazmaya kalsiyum akışını sağlar.

Uzun süreli kültürde, L-VGCC'lerin daha yüksek yoğunluğu ve uzun süreli açılması, nöronal yaşlanmanın ayırt edici bir özelliği olan kalsiyum aşırı yüklenmesine yol açar.

İndikatöre kalsiyum bağlanması, floresan üretir, yaşlı nöronlar daha yüksek floresan yoğunluğu sergiler ve stimülasyon üzerine artan hücre içi kalsiyum seviyelerini yansıtır.

Bu prosedürde, hücreleri karanlıkta oda sıcaklığında 60 dakika boyunca Fura2-ile inkübe edin, ardından lam